致白内障基因Hsf4b K65R位点突变对下游热休克蛋白表达的影响

作     者：娄强 谢盼盼 崔秀坤 马远方 胡延忠 LOU Qiang;XIE Pan-pan;CUI Xiu-kun;MA Yuan-fang;HU Yan-zhong

作者机构：河南大学医学院医学与分子免疫学实验室抗体药物河南省工程实验室河南开封475004 

出 版 物：《中国病理生理杂志》 (Chinese Journal of Pathophysiology)

年 卷 期：2015年第31卷第9期

页      面：1699-1703页

核心收录：

学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100104[医学-病理学与病理生理学] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(No.U1404826) 河南省教育厅项目(No.14B310015) 河南大学基本科研业务费科研专项(青年科研人才种子基金) 

主　　题：热休克因子4b 晶状体上皮细胞 热休克蛋白 点突变 

摘      要：目的:探讨致白内障基因热休克因子4b(Hsf4b)K65R位点突变对其调控下游热休克蛋白(HSP)表达的影响。方法:采用KOD-Plus-Mutagenesis-Kit试剂盒构建pWZL-blast-HA-Hsf4b/K65R赖氨酸突变质粒;通过慢病毒感染小鼠晶状体上皮细胞mLEC构建稳定表达Hsf4b/K65R突变质粒的细胞株;Western blotting检测Hsf4b在mLEC K65R点突变细胞株和野生株中的表达;Western blotting及real-time PCR检测K65R点突变后下游蛋白Hsp70、Hsp90、Hsp27和CryAB表达的变化。结果:阳性克隆PCR及基因测序证明慢病毒载体pWZL-blast-HAHsf4b/K65R构建成功。K65R点突变后不影响Hsf4b在小鼠晶状体上皮细胞mLEC中的表达,但能影响下游蛋白CryAB、Hsp27、Hsp70i和Hsp90a的表达。结论:pWZL-blast-HA-Hsf4b/K65R载体可用于慢病毒感染稳定细胞株构建。Hsf4b K65R位点突变能显著影响其对热休克蛋白的调控功能。