替米沙坦对3T3－L1脂肪细胞过氧化物酶体增殖物激活受体γ信号通路的影响

作     者：方涛 崔晓旭 沈娜 李永辉 息佩琪 张毅 谢云 李光伟 田凤石 Fang Tao;Cui Xiaoxu;Shen Na;Li Yonghui;Xi Peiqi;Zhang Yi;Xie Yun;Li Guangwei;Tian Fengshi

作者机构：天津市第四中心医院天津医科大学第四中心临床学院中心实验室300140 天津市第四中心医院天津医科大学第四中心临床学院中心心血管内科300140 天津医科大学代谢病医院神经内科 中国医学科学院阜外医院内分泌与心血管病诊治中心 

出 版 物：《中华医学杂志》 (National Medical Journal of China)

年 卷 期：2018年第98卷第26期

页      面：2104-2109页

核心收录：

学科分类：1007[医学-药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 100706[医学-药理学] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

基　　金：天津市应用基础与前沿技术研究计划(青年项目)(15JCQNJC13100) 天津市卫生行业重点攻关项目(16KG146) 天津市慢性病防治科技重大专项项目(17ZXMFSY00200) 天津市第四中心医院博硕基金项目 中国中青年临床研究基金.VG基金(2017-CCA-VG-021) 

主　　题：细胞周期蛋白依赖激酶5 过氧化物酶体增殖物激活受体γ 3T3-LI细胞 替米沙坦 

摘      要：目的观察替米沙坦对3T3-L1脂肪细胞过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）信号通路的影响，探讨替米沙坦延缓2型糖尿病病程的作用机制。方法诱导3T3-L1前脂肪细胞至80%成熟（对照组），加入50 ng/ml肿瘤坏死因子α（TNF-α）刺激1 h（TNF-α组），分别以0.1、5、10 μmol/L替米沙坦加入培养基干预24 h，即T0.1, T5和T10组。应用Western印迹检测PPARγ及其磷酸化水平、细胞周期依赖性蛋白激酶5（CDK5）表达变化；酶联免疫吸附测定（ELISA）检测培养基中脂联素含量。短发夹RNA（shRNA）沉默未分化3T3-L1的PPARγ，筛选PPARγ丝氨酸突变型3T3-L1细胞系即S273A、S112A、S186A，以进一步确定磷酸化位点。shRNA沉默CDK5，油红O染色、异丙醇萃取检测分化效率，以10 μmol/L替米沙坦干预成熟3T3-L1，Western印迹检测pPPARγ/PPARγ，ELISA检测培养基脂联素含量。结果TNF-α刺激及替米沙坦干预后各组CDK5表达差异均无统计学意义（均P〉0.05）。与TNF-α组相比，T5组、T10组pPPARγ/PPARγ降低，脂联素含量增加，差异均有统计学意义（均P〈0.05），T0.1组差异均无统计学意义（均P〉0.05）。与3T3-L1野生型（WT）相比，S186A、S112A组加入TNF-α后pPPARγ/PPARγ升高，脂联素降低，加入替米沙坦后pPPARγ/PPARγ降低，脂联素含量增加，差异均有统计学意义（均P〈0.05），S273A组pPPARγ/PPARγ、脂联素差异均无统计学意义（均P〉0.05）。异丙醇萃取显示沉默CDK5组（shCDK5）与随机对照（shCon）组相比3T3-L1分化差异无统计学意义（P〉0.05），Western印迹显示与shCDK5组相比，shCon组加入替米沙坦后pPPARγ/PPARγ降低，脂联素增加，差异均有统计学意义（均P〈0.05）。结论替米沙坦能够缓解因TNF-α刺激导致的PPARγ磷酸化水平升高，上调脂联素含量。CDK5介导了替米沙坦对3T3-L1脂肪细胞PPARγ信号通路的影响。替米沙坦的作用位点为PPARγ第273位丝氨酸，PPARγ第273位丝氨酸上游激酶为CDK5。