防止内源性过氧化物酶给培养神经元的免疫染色带来假阳性

作     者：阮奕文 谢瑶 杜淑华 

作者机构：中山医科大学解剖教研室广州510089 大庆职工医学院人体解剖教研室163312 

出 版 物：《广东解剖学通报》 (Anatomy Research)

年 卷 期：1998年第20卷第1期

页      面：53-53页

学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100102[医学-免疫学] 10[医学] 

主　　题：培养神经元 免疫染色 内源性 过氧化物酶 

摘      要：神经元组织切片的免疫染色过程中,为减少非特异性反应,最常用的方法是用与第二抗体来源的血清去吸附组织切片上的非特异性反应部位,而是否一定要用H_2O_2—甲醇去阻断组织内的过氧化物酶则未引起高度的重视.我们用3种不同的抗体检测培养神经元的内源性过氧化物酶对免疫染色造成的非特异性反应.这3种抗体分别是:来自兔的Nestin(标记神经前体细胞)多克隆抗体,稀释度为1:4000;来源于小鼠的NF(标记神经元)和GFAP(标记星形胶质细胞)的单克隆抗体,NF稀释度为1:3200,GFAP为1:6000.实验在两块96孔板培养的新生大鼠皮质神经组织中进行,一块板放进37℃1h,一块板放进4℃16h.每块板在加抗体前分别设有:①只加血清组;②只加H_2O_2—甲醇组;③H_2O_2—甲醇组+血清组.每组都按常规的免疫反应步骤,在经过上述各组的反应后,再分别加入一抗、二抗、三抗,最后进行DAB显色反应.结果显示:单加血清组,不论是经过哪种抗体的反应过程都呈现明显的非特异性反应,着色的细胞大多是园形或椭圆形(图1),