带有组氨酸标签的马传染性贫血病毒感染性分子克隆的构建

作     者：温建新 仇华吉 涂亚斌 王柳 彭金美 童光志 WEN Jian-xin;QIU Hua-ji;TU Ya-bin;WANG Liu;PENG Jin-mei;TONG Guang-zhi

作者机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 

出 版 物：《中国预防兽医学报》 (Chinese Journal of Preventive Veterinary Medicine)

年 卷 期：2005年第27卷第3期

页      面：193-195页

核心收录：

学科分类：0710[理学-生物学] 090601[农学-基础兽医学] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 071007[理学-遗传学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 090102[农学-作物遗传育种] 

基　　金："863计划"(2001AA223041) 国家自然科学基金(30170706)资助 

主　　题：马传染性贫血病毒 感染性分子克隆 组氨酸标签 马 传染性贫血 S2基因 

摘      要：马传染性贫血(EIA)弱毒疫苗的广泛使用存在野毒和疫苗毒鉴别困难的问题。本研究以已构建的马传染性贫血驴白细胞弱毒疫苗株的感染性分子克隆(pOK8266)为基础,在其S2基因内引入NspV酶切位点,将人工合成的编码6个组氨酸的寡核苷酸插入NspV位点,获得带有组氨酸标签的重组质粒pOK8266_HIS。将pOK8266_HIS转染驴白细胞,将驴白细胞转染产物传至第6代时,在电镜下观察到了典型的马传染性贫血病毒粒子。提取pOK8266_HIS衍生病毒的前病毒基因组DNA,通过PCR扩增和测序表明,衍生病毒基因组中引入了6个组氨酸标签,从而获得了带有分子标志的马传染性贫血弱毒疫苗株,为野毒株和疫苗病毒的鉴别诊断奠定了基础。本研究还证明了S2基因中的插入突变并不影响马传染性贫血病毒的体外复制。