免疫单扩散法测定重组铜绿假单胞菌外毒素A蛋白含量方法的建立及其应用

作     者：李燕婷 范锋锋 冯宜扬 金鑫 吴朝今 赵志强 谢贵林 谭小梅 

作者机构：兰州生物制品研究所有限责任公司兰州730046 

出 版 物：《中国新药杂志》 (Chinese Journal of New Drugs)

年 卷 期：2015年第24卷第20期

页      面：2346-2351页

学科分类：1007[医学-药学(可授医学、理学学位)] 10[医学] 

基　　金：国家"重大新药创制"科技重大专项(2013ZX09402302-212) 

主　　题：免疫单扩散法 方法验证 重组铜绿假单胞菌外毒素A 蛋白质纯化 收率 

摘      要：目的:探索建立免疫单扩散法测定不同料液中重组铜绿假单胞菌外毒素A(recombinant Pseudomonas aeruginosa exotoxin A,r EPA)蛋白含量新方法。方法:对缓冲液系统、最佳抗体浓度和最佳观测时间等关键因素进行摸索,确定方法的最佳条件。在此基础上,对该方法的专属性、精密度、准确性和标准曲线的可靠性进行验证,并将该方法应用于r EPA柱层析纯化中不同样品目标蛋白含量的测定及回收率计算。结果:最佳缓冲系统为0.85%Na Cl溶液,最佳抗体用量为50μL·m L-1,最佳观测计算时间为4 h。方法具有较好的专属性、精密度、准确性和线性。结论:初步建立了免疫单扩散试验测定不同料液中r EPA蛋白含量新方法,为其纯化工艺的优化奠定了基础。