CT-1及TTC的GST融合蛋白表达质粒的构建及表达

作     者：张伟 周跃 张正丰 李鑫兴 ZHANG Wei;ZHOU Yue;ZHANG Zheng-feng;LI Xin-xin

作者机构：第三军医大学新桥医院骨科重庆400037 

出 版 物：《免疫学杂志》 (Immunological Journal)

年 卷 期：2006年第22卷第1期

页      面：101-103页

核心收录：

学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(30472008) 

主　　题：心肌营养素-1 破伤风外毒素 质粒 

摘      要：目的构建心肌营养素-1(CT-1)和破伤风外毒素C片段(TTC)重组融合蛋白表达质粒。方法利用PCR、TA克隆等技术将CT-1及TTC基因克隆并连接到pGEX-4T-3,再做酶切鉴定、序列测定。在不同温度不同时间,通过IPTG诱导pGEX-CT-1/TTC在DH5α大肠杆菌中表达,SDS-PAGE分析表达量和可溶性蛋白GST-CT-1/TTC比例。结果构建的pGEX-CT-1/TTC酶切结果可见606 bp1、356 bp大小的片段,与预期结果一致,测序结果表明序列正确。通过IPTG诱导,发现35℃诱导4 h,目的蛋白GST-CT-1/TTC表达量占全菌的1/5,可溶性蛋白与包涵体比为2/5。结论本实验成功构建了pGEX-CT-1/TTC重组融合质粒,为下一步将其用于脊髓损伤的治疗研究打下了基础。