家蚕油蚕oc突变体突变基因的精细定位

作     者：殷娅茹 胡建 胡文波 杨成飞 王坤 刘春 林英 朱勇 王凌燕 YIN Ya-Ru;HU Jian;HU Wen-Bo;YANG Cheng-Fei;WANG Kun;LIU Chun;LIN Ying;ZHU Yong;WANG Ling-Yan

作者机构：西南大学生物技术学院家蚕基因组生物学国家重点实验室重庆400716 

出 版 物：《昆虫学报》 (Acta Entomologica Sinica)

年 卷 期：2018年第61卷第6期

页      面：627-636页

核心收录：

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 0901[农学-作物学] 090102[农学-作物遗传育种] 

基　　金：国家自然科学基金青年基金项目(31401048) 重庆市前沿与应用基础研究计划一般项目(cstc2014jcyj A80007) 中央高校基本科研业务费专项资金(XDJK2017D114) 

主　　题：家蚕 油蚕突变体 尿酸 oc突变体 精细定位 

摘      要：【目的】油蚕oc突变体是家蚕Bombyx mori油蚕突变体的一种,经典遗传学连锁图谱已经将oc突变基因定位在5号染色体40.8 c M座位。本研究旨在对oc突变体候选基因进行精细定位并克隆,探究oc性状形成的分子机制。【方法】以油蚕oc突变品系和野生型家蚕品系大造(Dz)为亲本,其杂交产生的F1代雄性个体与oc突变的雌性个体进行回交得到的1 397头BC_1代个体为定位材料,以家蚕已经报道的基因组序列为参考设计markers,通过亲本及F1代个体筛选多态性markers,并利用多态性markers和BC_1代个体对oc突变基因进行精细定位。通过半定量RT-PCR和实时荧光定量PCR(q PCR)筛选oc紧密连锁区间内的候选基因,确定目标候选基因,继而克隆和测序该基因,分析油蚕oc突变的原因。【结果】利用1 397头BC_1代个体和11对有效的多态性markers将oc突变基因定位在M10与M11两个markers之间,物理图谱距离大约为234 kb。通过家蚕基因组数据库对oc连锁区域内的基因进行检索发现该区域有5个预测基因。对这5个预测基因在10个家蚕品系中进行的表达分析发现,只有BGIBMGA003572基因在oc突变个体体壁的表达量明显比正常个体中的低。通过基因的同源分析发现该基因编码的蛋白和人类单羧酸转运蛋白9(可能的尿酸转运蛋白)是同源蛋白,推测其为oc突变的候选基因。对BGIBMGA003572进行的克隆和测序结果显示其编码序列有5个氨基酸在oc突变体中发生了突变。【结论】通过定位克隆,本研究将oc突变基因定位在了234 kb的紧密连锁区间,其中编码单羧酸转运蛋白9的BGIBMGA003572可能和oc突变体的表型有关。