Brevican基因敲除小鼠的制备

作     者：韩晞 董艳 HAN Xi;DONG Yan

作者机构：复旦大学附属华山医院神经外科上海200040 第二军医大学长征医院神经外科上海200003 

出 版 物：《第二军医大学学报》 (Academic Journal of Second Military Medical University)

年 卷 期：2011年第32卷第8期

页      面：818-821页

核心收录：

学科分类：10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金(30571912)~~ 

主　　题：brevican 基因敲除小鼠 胚胎干细胞 同源重组 

摘      要：目的制备brevican基因敲除小鼠。方法采用ET克隆方法,构建brevican打靶载体。线性化打靶载体,电转化胚胎干细胞(embryonic stem cell,ES),将正确同源重组的ES细胞注射入囊胚腔,生育嵌合体,再交配繁育杂合子及纯合子。PCR法鉴定小鼠的基因型。结果将PGK启动子指导的NEO表达框敲进Bcan第3外显子,敲除第3～8外显子序列,得到打靶载体,上游臂为2.4 kb,下游臂为4.8 kb。基因打靶后,得到双臂均发生正确同源重组的克隆数14个。利用阳性ES细胞克隆注射入囊胚,得到3只嵌合率大于50%的雄鼠,繁育得到6只Brevican-/-纯合子小鼠。结论利用同源重组方法,成功敲除干细胞靶基因,建立Brevican-/-建系小鼠。