粗皮桉ISSR-PCR反应体系优化

作     者：陈升侃 项东云 邓紫宇 梁建新 蓝必布 李昌荣 梁机 CHEN Sheng-kan;XIANG Dong-yun;DENG Zi-yu;LIANG Jian-xin;LAN Bi-bu;LI Chang-rong;LIANG Ji

作者机构：广西大学林学院广西南宁530004 广西优良用材林资源培育重点实验室广西林科院广西南宁530002 广西国有大桂山林场广西贺州542800 

出 版 物：《桉树科技》 (Eucalypt Science & Technology)

年 卷 期：2015年第32卷第1期

页      面：1-8页

学科分类：0710[理学-生物学] 090701[农学-林木遗传育种] 0907[农学-林学] 07[理学] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 

基　　金：广西优良用材林资源培育重点实验室开放课题(12A0101) 广西科学研究与计划开发项目:桉树中大径级锯材培育与加工利用技术合作研究(桂科合1347004-3) 

主　　题：粗皮桉 ISSR-PCR 体系优化 单因素试验 正交试验 

摘      要：为建立粗皮桉ISSR-PCR优化反应体系,先通过单因素试验确定影响粗皮桉ISSR-PCR 5个因素(Mg2+、d NTP、Taq DNA聚合酶、DNA模板、引物)的较适宜浓度范围,在此基础上进一步通过正交试验对5个因素4个水平进行优化,并用DPS软件分析试验结果。结果表明粗皮桉ISSR-PCR的优反应体系为:在25μL反应体系中,10×PCR buffer 2.5μL、Mg Cl 2.0 mmol·L-1、d NTPs 0.3 mmol·L-1、Taq DNA聚合酶1.25 U、DNA模板60 ng、引物0.8μmol·L-1。通过梯度试验确定的扩增程序为:94℃预变性5 min,然后按94℃变性1 min,51℃退火3 min,72℃延伸2 min,进行35个循环,最后72℃延伸5 min,4℃保存。