硫化氢对过氧化氢诱导的原代乳鼠心肌细胞氧化损伤的影响及其机制

作     者：陈玉映 胡允兆 钟健开 郑素琳 何宗云 吴焱贤 吴赛珠 CHEN Yu-ying;HU Yun-zhao;ZHONG Jian-kai;ZHENG Su-lin;HE Zong-yun;WU Yan-xian;WU Sai-zhu

作者机构：广东省佛山市顺德区第一人民医院心血管内科528300 

出 版 物：《中华心血管病杂志》 (Chinese Journal of Cardiology)

年 卷 期：2013年第41卷第4期

页      面：327-332页

核心收录：

学科分类：1002[医学-临床医学] 100201[医学-内科学(含：心血管病、血液病、呼吸系病、消化系病、内分泌与代谢病、肾病、风湿病、传染病)] 10[医学] 

主　　题：肌细胞 心脏 氧化性应激 硫化氢 过氧化氢 

摘      要：目的探讨硫化氢（H2s）对过氧化氢（H2O2）诱导的原代乳鼠心肌细胞氧化损伤的影响及其可能机制。方法在常规培养3d的原代乳鼠心肌细胞中加入不同浓度（10、100、1000μmol／L）的H2O2处理24h建立心肌细胞氧化损伤的模型，分别为10μmol／LH202模型组、100μmol／LH2O2模型组及1000μmol／LH2O2模型组，另以完全培养基进行常规培养作为对照组。另外，NaHS配成不同的终浓度（1、10、100μmol／L）单纯作用或分别与100μmol／LH22O共同作用于心肌细胞24h探讨NaHS对H202诱导的原代乳鼠心肌细胞的影响，分别为1μmol／LNaHS＋100μmol／LH2O2处理组、10μmol／LNaHS＋100μmol／LH202处理组、100μmol／LNaHS＋100μmol／LH2O2处理组、单纯10μmol／LNariS处理组、单纯100μmo]／LNariS处理组，另设100μmol／LH202模型组和以完全培养基进行常规培养作为对照组。应用MTT比色法检测细胞存活率，黄嘌呤氧化酶法检测超氧化物歧化酶（SOD）的活力，硫代巴比妥酸比色法检测丙二醛（MDA）含量，化学比色法测定乳酸脱氢酶（LDH）活性。流式细胞术检测细胞凋亡百分率，罗丹明123（Rh123）染色荧光显微镜照相检测细胞线粒体膜电位（mitoehondrial membrane potential，MMP），2，7，-二氯荧光黄双乙酸盐染色荧光显微镜照相检测细胞内的活性氧簇（nos）水平。结果10、100、1000μmol／LH2O2处理原代乳鼠心肌细胞24h后，心肌细胞存活率和培养基上清液SOD活力均呈剂量依赖性地下降，细胞蛋白裂解液MDA含量、细胞培养液LDH活性则呈剂量依赖性地升高。100μmol／LH2O2模型组细胞存活率显著低于对照组（P=0．001），MDA含量显著高于对照组（P=0．003），10μmol／LH2O2模型组的SOD活力及LDH活性与对照组比较差异已有统计学意义（P分别为0．013和0．028）。1、10和100txmol／L的NariS与100Ixmol／LH，0，共同作用心肌细胞24h可呈剂量依赖性地抑制H2O2诱导的细胞存活率、SOD活力的下降以及LDH活性、MDA含量的升高，其中10和100μmol／LNaHS＋100μmol／LH202处理组与100μmol／LH2O2模型组比较差异均有统计学意义（P均〈0．05）。100μmol／LH20模型组DCF荧光强度显著高于对照组（P=0．003），而10和100ixmol／LNaHS＋100v,mol／LH202处理组DCF荧光强度均显著低于100μmol／LH2O2模型组（P分别为0．017和0．000）。此外，单纯10和100μmol／LNaHS处理组DCF荧光强度与对照组比较差异均无统计学意义。100μmol／LH20模型组MMP显著低于对照组（P=0．000），而10和100μmol／LNaHS＋100μmol／LH202处理组MMP均高于100μmol／LH2O2模型组（P均〈0．05）。此外，单纯10和100Ixmol／LNaHS处理组MMP与对照组比较差异均无统计学意义。10和100μmol／LNaHS＋100μmoL／LH202处理组心肌细胞的凋亡率分别为（36．7±4．9）％和（20．1±1．9）％均显著低于100μmoULH20：模型组[（48．9±5．6）％]，P均〈0．05。结论H2s可对抗H2O2诱导的心肌细胞氧化损伤，其机制可能与减少ROS生成、升高MMP以及降低心肌细胞凋亡率有关。