以人羊膜为支架的表皮黑素细胞培养与生物活性鉴定
Culture of human epidermal melanocytes with human amniotic membrane as a scaffold and their biological ability identification作者机构：武汉大学人民医院皮肤科430060
出 版 物：《中华皮肤科杂志》 (Chinese Journal of Dermatology)
年 卷 期：2011年第44卷第2期
页 面：117-120页
核心收录：
学科分类：1002[医学-临床医学] 100206[医学-皮肤病与性病学] 10[医学]
摘 要：目的 从吸引疱疱顶微小皮片建立人表皮黑素细胞（MC）原代培养,以人羊膜为支架培养MC,观察羊膜对MC黏附、增殖和树突发育的影响.方法 用负压吸疱法分离疱顶微小皮片,多巴染色后对取自同一个体下腹部和前臂屈侧皮片的MC进行计数.皮片经胰酶消化后自基底面轻刮表皮细胞建立原代MC培养,将培养的第2～4代MC接种至新鲜或冻存羊膜上共孵育不同时间后,倒置显微镜下观察MC形态和树突发育.行石蜡包埋组织切片,HE染色后观察MC对羊膜的黏附.用MTT比色法测定接种在羊膜上的MC存活率.结果 前臂屈侧吸引疱疱顶皮片多巴染色阳性细胞个数为（1543.1±113.3）个/mm2,腹部皮片为（857.4±101.7）个/mm2.在4周内建立MC原代培养至少需要从2个疱顶（面积约25.1 mm2）的前臂皮片获取的表皮细胞.倒置显微镜下观察,与单纯接种细胞培养皿的MC比较,接种至新鲜或冻存羊膜上继续培养4、8、12 d的MC形态多为两极,树突细长延伸.HE染色示MC能黏附并均匀分布在羊膜的基底膜层表面.MTT法测定结果示,羊膜对MC的分裂增殖有抑制,但冻存羊膜与新鲜羊膜对MC增殖抑制差异无统计学意义（P0.05）.结论 人前臂屈侧皮肤富含活性MC,是获取吸引疱疱顶微小皮片建立MC原代培养的较好部位.人羊膜支持MC黏附生长和树突发育,有望成为一种能荷载体外培养扩增MC的人源生物支架.
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