雷洛昔芬抗体的制备及ELISA方法的初步建立

作     者：童雅琪 张羽 伍金娥 常超 TONG Ya-qi;ZHANG Yu;WU Jin-e;CHANG Chao

作者机构：武汉轻工大学食品科学与工程学院湖北武汉430023 武汉轻工大学教育部大宗粮油精深加工省部共建重点实验室湖北省农产品加工与转化重点实验室湖北武汉430023 

出 版 物：《现代食品科技》 (Modern Food Science and Technology)

年 卷 期：2018年第34卷第5期

页      面：198-203页

学科分类：1007[医学-药学(可授医学、理学学位)] 0832[工学-食品科学与工程（可授工学、农学学位）] 1004[医学-公共卫生与预防医学(可授医学、理学学位)] 10[医学] 

基　　金：武汉市应用基础项目(2013020501010179) 

主　　题：雷洛昔芬 碳二亚胺法 人工抗原 ELISA 

摘      要：本文主要研究了雷洛昔芬抗体的制备和酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immuno sorbent assay,ELISA)方法的初步建立。实验中采用丁二酸酐对雷洛昔芬进行衍生,合成了雷洛昔芬半抗原。采用碳二亚胺法,将雷洛昔芬半抗原与牛血清白蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)偶联合成免疫原和包被抗原,并通过紫外光谱进行鉴定,结果显示雷洛昔芬与载体蛋白偶联成功。免疫大白兔制备了雷洛昔芬抗体,抗体效价达1.28×10~5,半数抑制浓度(half inhibit concentration,IC50)15.4μg/L,与其他类似抗雌激素药物没有交叉反应,说明所制备的抗体特异性好。通过优化抗原抗体反应浓度初步建立了雷洛昔芬ELISA方法,结果显示最佳抗原浓度为300μg/L,最佳抗体工作浓度为1:1.0×10~5,标准曲线在0.4~102.4μg/L范围内线性关系好,R^2=0.9853,最低检测能力0.4μg/L。本研究为进一步开发雷洛昔芬快速检测试剂盒提供了技术参考。