上皮细胞黏附分子抗体杂交瘤细胞RP-PCR产物中的可变区假轻链基因序列的鉴定和去除

作     者：柳耀 冯维博 蒲雪茵 张倩 刘婷婷 杨舒雅 王静 孙元杰 张葵 

作者机构：空军军医大学学员旅陕西西安710032 空军军医大学基础医学院免疫学教研室陕西西安710032 空军军医大学西京医院临床免疫科陕西西安710032 

出 版 物：《细胞与分子免疫学杂志》 (Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology)

年 卷 期：2018年第34卷第1期

页      面：81-84页

核心收录：

学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 08[工学] 09[农学] 100102[医学-免疫学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 090102[农学-作物遗传育种] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金(81401338) 陕西省基础研究计划(2016JM3032) 

主　　题：上皮细胞黏附分子 假轻链 抗体制备 

摘      要：目的发现制备上皮细胞黏附分子(EpCAM)基因工程抗体时,在SP2/0细胞出现的假轻链并去除。方法从EpCAM单克隆抗体的杂交瘤细胞中逆转录提取RNA后,采用特定引物对目的序列进行PCR扩增,对扩增产物利用BCIⅥ限制性核酸内切酶进行酶切筛选,对酶切产物进行测序。结果来源于SP2/0细胞的EpCAM单克隆抗体杂交瘤细胞中存在异常抗体轻链序列(假轻链基因),特异的酶切可以筛选出有效的轻链基因序列。结论酶切法可以去除EpCAM基因工程抗体杂交瘤细胞中的假轻链基因,为消除针对EpCAM的基因工程抗体制备中的假轻链提供了可靠的方法。