禾谷镰孢荧光定量检测体系的建立及其在玉米苗枯病上的应用

作     者：葛波 杨洋 张申萍 王晓鸣 陈国康 段灿星 Ge Bo;Yang Yang;Zhang Shenping;Wang Xiaoming;Chen Guokang;Duan Canxing

作者机构：西南大学植物保护学院重庆400715 中国农业科学院作物科学研究所/国家农作物基因资源与基因改良重大科学工程北京100081 

出 版 物：《植物保护学报》 (Journal of Plant Protection)

年 卷 期：2018年第45卷第3期

页      面：409-415页

核心收录：

学科分类：09[农学] 0904[农学-植物保护] 090401[农学-植物病理学] 090402[农学-农业昆虫与害虫防治] 

基　　金：国家重点研发计划(2016YFD0100103) 国家现代农业(玉米)产业技术体系(CARS-02) 

主　　题：禾谷镰孢 实时荧光定量检测 土壤 玉米苗枯病 预警 

摘      要：为实现对田间土壤中禾谷镰孢Fusarium graminearum的定量检测,本研究构建了土壤含菌量与玉米苗枯病病情指数的回归模型。基于禾谷镰孢甾醇14α-去甲基化酶基因CYP51C序列,设计特异性引物HQ1-F/HQ1-R,利用引物建立实时荧光定量PCR(RT-q PCR)体系,选取4个玉米自交系品种进行室内苗枯病接种试验,调查其病情指数,利用RT-qPCR体系检测土壤禾谷镰孢含菌量,并对病情指数和土壤禾谷镰孢含菌量进行回归。结果表明,仅禾谷镰孢扩增出目的条带并且可从多种病原菌土壤中检测出。RT-qPCR的熔解曲线具有单一吸收峰,扩增曲线的循环阈值与模板浓度呈良好的线性关系,扩增效率为104.7%,标准曲线为y=-3.2137x+34.9560(R^2=0.9968),最低可检测到1 pg/μL的DNA。随着土壤禾谷镰孢接菌量的增加,单位土壤禾谷镰孢含菌量呈线性增加,即y=13.603x-85.370(R^2=0.9998)。4个玉米品种的病情指数与土壤禾谷镰孢含菌量的回归曲线分别为y=0.0789x+22.0590(R^2=0.7949)、y=0.0304x+7.8686(R^2=0.9579)、y=0.0458x+23.7540(R^2=0.5420)、y=0.0471x+32.0760(R^2=0.6753)。