人热休克蛋白90β-cDNA基因克隆及其真核表达载体的构建

作     者：刘涛 赵菊梅 田聆 魏于全 梁传余 Liu Tao;Zhao Jumei;Tian Ling;Wei Yuquan;Liang Chuanyu

作者机构：四川大学华西医院耳鼻喉科成都610041 四川大学华西医院肿瘤生物治疗研究中心.人类疾病生物治疗教育部重点实验室成都610041 

出 版 物：《生物医学工程学杂志》 (Journal of Biomedical Engineering)

年 卷 期：2006年第23卷第6期

页      面：1289-1293页

核心收录：

学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(30270524) 

主　　题：热休克蛋白90β(HsP90β)真核表达载体质粒pcDNA3.1(+) 

摘      要：本研究旨在克隆人热休克蛋白90β(HSP90β)基因,构建其真核表达载体pcDNA3.1(+)-hHSP90β,为研究hHSP90β的基因治疗奠定实验基础。按Invitrogen公司操作说明用TRIzolReagent提取鼻咽癌总RNA,并经RT-PCR获得hHSP90βcDNA。用纯化的hHSP90βcDNA与PGEMEasyTVector连接,挑选白色菌落进行鉴定,结果为重组质粒,命名为PGEM-hHSP90β。将PGEM-hHSP90β及pcDNA3.1(+)质粒经AflII和Xbal双酶切、胶回收纯化酶切片段后,体外连接酶切片段,使其定向重组,再将重组DNA转化XL1-blue,经复苏后,在含Ampr的LB固体培养基上筛选出阳性克隆。挑取的LB固体培养基上的单菌落经酶切及测序鉴定,证实为阳性克隆,即hHSP90β与pcDNA3.1(+)体外重组成功,命名为pcDNA3.1(+)-hHSP90β。采用体外重组技术,成功地将人HSP90β插入了真核表达载体pcDNA3.1(+)中。