苹果茎痘病毒TaqMan探针实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立

作     者：秦子禹 孙建设 王娜 邵建柱 QIN Zi-yu;SUN Jian-she;WANG Na;SHAO Jian-zhu

作者机构：河北农业大学园艺学院河北保定071001 河北科技师范学院园艺科技学院河北昌黎066600 

出 版 物：《园艺学报》 (Acta Horticulturae Sinica)

年 卷 期：2015年第42卷第7期

页      面：1400-1408页

核心收录：

学科分类：09[农学] 0902[农学-园艺学] 090201[农学-果树学] 

基　　金：国家现代农业产业技术体系建设专项资金项目(CARS-28) 

主　　题：苹果茎痘病毒 TaqMan探针 实时荧光定量RT-PCR 

摘      要：为建立一种检测苹果茎痘病毒(Apple stem pitting virus,ASPV)的Taq Man探针实时荧光定量RT-PCR方法,根据ASPV外壳蛋白基因(coat protein,cp)保守序列设计了特异性引物和Taq Man探针,以体外转录的RNA为标准品构建标准曲线,并对该方法的特异性、灵敏性、重复性进行检验。建立的标准曲线决定系数达0.996,扩增效率为99%;该方法特异性好,与苹果茎沟病毒(ASGV)、苹果褪绿叶斑病毒(ACLSV)、苹果锈果类病毒(ASSVd)均无交叉反应;其最低检测限为1.31×102 copies·μL-1,灵敏度比常规RT-PCR高100倍;批内和批间变异系数均小于1.85%。该方法具有特异性强、灵敏度高、重复性好等优点,适用于田间样品中ASPV的快速定量检测。