转染人端粒酶反转录酶永生化成釉细胞瘤细胞的生物学特性

作     者：陶谦 吕标 乔彬 郑超群 陈之锋 TAO Qian;L(U) Biao;QIAO Bin;ZHENG Chao-qun;CHEN Zhi-feng

作者机构：中山大学光华口腔医学院·附属口腔医院口腔颌面外科中山大学口腔医学研究所广州510055 

出 版 物：《中华口腔医学杂志》 (Chinese Journal of Stomatology)

年 卷 期：2009年第44卷第8期

页      面：474-478页

核心收录：

学科分类：1002[医学-临床医学] 100210[医学-外科学(含：普外、骨外、泌尿外、胸心外、神外、整形、烧伤、野战外)] 10[医学] 

基　　金：广州市科技计划项目(2008Z1-E191) 

主　　题：成釉细胞瘤 转染 永生化 

摘      要：目的转染人端粒酶反转录酶（human telomerase reverse transenptase，hTERT）基因建立永生化成釉细胞瘤（ameloblastoma，AM）细胞株并观察其生物特性。方法构建hTERT基因反转录病毒载体pLXSN—neo—hTERT转染AM细胞，G418筛选后进行免疫细胞化学（immunocytochemistry，ICC）鉴定细胞来源、细胞形态学观察、细胞增殖动力学研究、细胞衰老β-半乳糖苷酶（senescence associated β galactosidase，SA—β—Gal）染色、反转录聚合酶链反应（RT—PCR）检测hTERT基因表达、端粒重复序列扩增法检测端粒酶活性。结果未转染AM细胞体外培养43d停止增殖，细胞群体倍增数（population doublings，PDL）为6；转染后AM细胞增殖活跃，目前PDL值已达到65；广谱细胞角蛋白阳性、波形蛋白阴性。与未转染细胞相比，转染后细胞形态较未转染细胞不规则；SA—β—Gal染色结果未见阳性衰老信号。RT—PCR检测hTERT mRNA在转染AM细胞中稳定表达，TRAP检测端粒酶活性相对未转染细胞呈高表达。结论转染hTERT基因的AM细胞呈现稳定增殖的永生化状态，为进一步研究AM提供良好的体外模型。