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转染人端粒酶反转录酶永生化成釉细胞瘤细胞的生物学特性

Characterization of growth and proliferation in a telomerase-immortalized ameloblastoma cell line

作     者:陶谦 吕标 乔彬 郑超群 陈之锋 TAO Qian;L(U) Biao;QIAO Bin;ZHENG Chao-qun;CHEN Zhi-feng

作者机构:中山大学光华口腔医学院·附属口腔医院口腔颌面外科中山大学口腔医学研究所广州510055 

出 版 物:《中华口腔医学杂志》 (Chinese Journal of Stomatology)

年 卷 期:2009年第44卷第8期

页      面:474-478页

核心收录:

学科分类:1002[医学-临床医学] 100210[医学-外科学(含:普外、骨外、泌尿外、胸心外、神外、整形、烧伤、野战外)] 10[医学] 

基  金:广州市科技计划项目(2008Z1-E191) 

主  题:成釉细胞瘤 转染 永生化 

摘      要:目的转染人端粒酶反转录酶(human telomerase reverse transenptase,hTERT)基因建立永生化成釉细胞瘤(ameloblastoma,AM)细胞株并观察其生物特性。方法构建hTERT基因反转录病毒载体pLXSN—neo—hTERT转染AM细胞,G418筛选后进行免疫细胞化学(immunocytochemistry,ICC)鉴定细胞来源、细胞形态学观察、细胞增殖动力学研究、细胞衰老β-半乳糖苷酶(senescence associated β galactosidase,SA—β—Gal)染色、反转录聚合酶链反应(RT—PCR)检测hTERT基因表达、端粒重复序列扩增法检测端粒酶活性。结果未转染AM细胞体外培养43d停止增殖,细胞群体倍增数(population doublings,PDL)为6;转染后AM细胞增殖活跃,目前PDL值已达到65;广谱细胞角蛋白阳性、波形蛋白阴性。与未转染细胞相比,转染后细胞形态较未转染细胞不规则;SA—β—Gal染色结果未见阳性衰老信号。RT—PCR检测hTERT mRNA在转染AM细胞中稳定表达,TRAP检测端粒酶活性相对未转染细胞呈高表达。结论转染hTERT基因的AM细胞呈现稳定增殖的永生化状态,为进一步研究AM提供良好的体外模型。

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