T载体介导的基于attL核心区LR反应的简化快速Gateway克隆系统（英文）

作     者：朱晓博 张贵粉 王友梅 Staffan Persson 谢国生 王令强 ZHU Xiao-Bo1,2, ZHANG Gui-Fen1,2, WANG You-Mei1,2, Staffan Persson1,2,3, XIE Guo-Sheng1,2, WANG Ling-Qiang1,2

作者机构：华中农业大学生物质与生物能源研究中心武汉430070 华中农业大学植物科学与技术学院武汉430070 墨尔本大学生物科学学院细胞壁研究中心澳大利亚墨尔本VIC3010 

出 版 物：《中国生物化学与分子生物学报》 (Chinese Journal of Biochemistry and Molecular Biology)

年 卷 期：2018年第34卷第3期

页      面：341-350页

核心收录：

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 090102[农学-作物遗传育种] 

基　　金：Supported by Fundamental Research Funds for the Central Universities of China(No.2662015PY009) National Natural Science Foundation of China(No.31171775,No.31171524 and No.31371550) 

主　　题：Gateway克隆技术 直接LR反应 序列比对 特异位点 

摘      要：Gateway克隆技术已得到广泛的应用。该技术先通过BP反应将目标片段连到带有完整attL特异识别位点的入门载体,然后与终载体通过LR反应得到表达载体。Gateway克隆方法与传统的酶切连接方法相比有快速简单等优点。但是,BP和LR酶都非常昂贵。本研究首先对3个常用Gateway载体的atts特异位点序列比对发现,attL序列核心交换位点core attL的21~22 bp长的碱基是保守和必要的。由此,设计含有core-attL序列的引物,通过PCR克隆得到DNA片段并连入p MD18-T载体,然后进行LR反应,可成功得到目标表达载体,并在保守的位点上正确重组。本研究还对其中一个带有绿色荧光蛋白基因的表达载体转化至烟草,能够正常表达该蛋白质。结果表明,通过将含有attL核心位点基因片段连接到p MD18-T载体上,可以省略BP反应而将目标片段连接到终载体上,节约了反应时间和成本。