猪繁殖与呼吸综合征病毒核衣壳蛋白的原核可溶性表达和间接ELISA抗体检测方法的初步建立

作     者：王俊 代军飞 马炳 丁耀忠 欧云文 刘永生 赵乐辉 张永光 张杰 WANG Jun1,2, DAI Jun-fei1, MA Bing1, DING Yao-zhong1, OU Yun-wen1, LIU Yong-sheng1, ZHAO Le-hui2, ZHANG Yong-guang1,3,ZHANG Jie1

作者机构：中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室/国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046 辽东学院农学院辽宁丹东118003 江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心江苏扬州225009 

出 版 物：《中国兽医科学》 (Chinese Veterinary Science)

年 卷 期：2018年第48卷第4期

页      面：419-427页

学科分类：090601[农学-基础兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

基　　金：国家国际科技合作项目(2012DFG31890) 中波农业科技中心课题 中国农业科学院农业科技创新工程项目 

主　　题：猪繁殖与呼吸综合征病毒 核衣壳蛋白 原核可溶性表达 间接ELISA 抗体检测 

摘      要：猪繁殖与呼吸综合征病毒（porcine reproductive and respiratory syndrome virus，PRRSV）的核衣壳蛋白N是一种含量高、免疫原性强、最早刺激机体产生特异性抗体的主要结构蛋白，研制针对N蛋白抗体的检测方法对进一步实现PRRS的流行病学监测和诊断具有重要意义。本研究以带有MBP标签的pMAL—C4X作为表达载体。实现了N蛋白在大肠杆菌中的可溶性表达，每升菌液经纯化可得约20mg的融合N蛋白。Western—blot结果表明．融合N蛋白能被抗MBP的单抗和PRRSVN蛋白的家兔多抗特异识别。以融合N蛋白为包被抗原建立的间接ELISA方法不与猪圆环病毒2型（PCV2）、古典猪瘟病毒（CSFV）、伪狂犬病病毒（PRV）、猪细小病毒（PPV）的阳性猪血清发生交叉反应，但与1型PRRSV阳性猪血清有较强反应性。田间样品检测结果表明。本研究建立的间接ELISA抗体检测方法与IDEXX同类试剂盒的总符合率为90％左右。本研究以MBP作为促溶标签，实现了PRRSVN蛋白在大肠杆菌内的高效可溶性表达，重组蛋白具有良好的免疫反应性．这为深入研究N蛋白功能以及开发PRRS相关诊断制剂奠定了基础。