两质粒系统重配甲型H1N1流感病毒株的研究

作     者：周珊珊 杨晓岚 孙芳 程晋霞 谷宏婧 段跃强 杨鹏辉 王希良 ZHOU Shanshan1,2, YANG Xiaolan2, SUN Fang2, CHENG Jinxia2, GU Hongjing2, DUAN Yueqiang2, YANG Penghui2, WANG Xiliang2

作者机构：安徽医科大学研究生院合肥230601 军事医学科学院微生物流行病研究所免疫学研究室病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 

出 版 物：《免疫学杂志》 (Immunological Journal)

年 卷 期：2018年第34卷第4期

页      面：353-358页

核心收录：

学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100102[医学-免疫学] 10[医学] 

基　　金：国家重点研发计划(2017YFC1200800) 

主　　题：反向遗传学 两质粒系统 流感病毒 

摘      要：目的构建两质粒冷适应流感病毒拯救系统,提高流感病毒的重配效率。方法本研究通过构建克隆载体pfastbac△plh HTB,将流感病毒A/Ann Arbor/6/60(H2N2)6个内部基因(PB2、PB1、PA、NP、M、NS)的双向转录表达元件定向克隆入此载体,获得pfastbac△plh HTBP6。同时将流感病毒A/California/7/2009(H1N1)表面基因(HA、NA)双向转录表达元件定向克隆入p ENTR-1A质粒,获得p ENTR-1AP2。将2个重组质粒共转染MDCK/COSI细胞,细胞上清接种10日龄SPF鸡胚,收取尿囊液,血凝实验筛选阳性株,并进行全面鉴定。结果本研究利用两质粒系统成功重配甲型H1N1流感病毒株,命名为TRG A/California/07/2009(H1N1)Vca,重配病毒株传代后HA效价为2~8,形态符合流感病毒典型特征,大小80~120 nm,具有冷适应、温度敏感表型。结论两质粒流感病毒拯救系统为高效重配流感疫苗株提供了新策略。