双功能短肽修饰壳聚糖介导miR-140基因修复兔关节软骨损伤的效果

作     者：彭效祥 张洋洋 宋伟 孙艳丽 王鲁娟 刘庆 赵荣兰 Peng Xiaoxiang;Zhang Yangyang;Song Wei;Sun Yanli;Wang Lujuan;Liu Qing;Zhao Ronglan

作者机构：潍坊医学院医学检验学系潍坊医学院临床检验诊断学山东省“十二五”高校重点实验室潍坊医学院附属医院山东省临床检验重点专科山东省潍坊市261053 潍坊市第二人民医院康复科 

出 版 物：《中华创伤杂志》 (Chinese Journal of Trauma)

年 卷 期：2018年第34卷第3期

页      面：246-252页

核心收录：

学科分类：1002[医学-临床医学] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金（81770915,81301737） 山东省自然科学基金（ZR2015HL025,ZR2012HQ034） 潍坊医学院博士基金项目（2017BSQD05） 

主　　题：微RNAs 软骨 关节 壳聚糖 信号肽 

摘      要：目的观察核定位信号肽偶联核激酶底物短肽（NNS）修饰的壳聚糖（CS）（NNSCS）介导人miR-140基因，局部转染促进兔关节软骨损伤修复的效果。方法构建GV268-miR-140真核表达质粒，将NNSCS分别与阴性对照质粒GV268及重组质粒GV268-miR-140复合形成NNSCS／GV268及NNSCS／GV268-miR-140复合物。选取健康雄性新西兰大耳白兔18只，单侧右后肢按随机数字表法分成转基因组（A组）、阴性对照组（B组）、假手术组（C组），每组6只。A组与B组均制备股骨滑车全层软骨损伤模型；C组仅暴露股骨滑车关节面。术后1周，A组给予NNSCS／GV268-miR-140复合物，B组给予NNSCS／GV268复合物，C组给予等量等渗盐水，每周2次，持续7周。术后8周末，处死动物并取材。实时荧光定量PCR（RT-qPCR）检测缺损区软骨组织内miR-140、Sox9、Aggrecan和Hdac4表达；HE染色、番红O-固绿染色及Aggrecan免疫组化染色评估缺损区软骨修复情况。结果RT-qPCR检测结果显示，A组miR-140表达水平（3．16±0．37）较B组（1．00±0．24）和C组（1．24±0．18）明显升高（P〈0．05）；A组Sox9表达水平（4．38±0．66）较B组（1．04±0．04）和C组（1．19±0．30）明显上调（P〈0．05）；A组Aggrecan表达水平（3．63±0．58）较B组（1．21±0．14）和C组（1．34±0．13）明显上调（P〈0．05）。A组Hdac4表达水平（0．37±0．06）较B组（0．81±0．06）明显下调（P〈0．05）。HE染色、番红O-固绿染色及Aggrecan免疫组化染色显示，A组缺损处呈现明显的软骨性修复，B组缺损处出现大量纤维组织增生和炎性细胞浸润，未见软骨性修复。结论NNS可携带外源基因进入软骨细胞并在局部大量表达；高表达的miR-140可能通过上调Aggreean和Sox9表达及下调Hdae4表达，从而明显促进损伤软骨的修复，可为其今后用于治疗软骨损伤提供实验基础。