结核杆菌活动期高表达基因Rv1776c的克隆及其在耻垢分枝杆菌中的表达
Cloning of high expression gene Rv1776c in active phase of Mycobacterium tuberculosis and its expression in Mycobacterium smegmatis作者机构：重庆市江津区中心医院重庆市江津呼吸疾病研究所呼吸内科重庆402260
出 版 物：《中国微生态学杂志》 (Chinese Journal of Microecology)
年 卷 期：2018年第30卷第1期
页 面：27-30页
基 金：重庆市医疗特色专科项目 重庆市区域重点学科建设项目(zdxk201701) 重庆市江津区科技计划项目(Y2017001)
主 题：Rv1776c基因 pMV-Rv1776c 重组耻垢分枝杆菌
摘 要：目的构建表达结核分枝杆菌Rv1776c基因的重组耻垢分支杆菌,并鉴定该基因在重组耻垢分支杆菌中的活性。方法采用PCR技术克隆结核分枝杆菌Rv1776c基因,构建大肠埃希菌-分支杆菌穿梭表达质粒pMV-Rv1776c,通过酶切和测序鉴定其正确性,用电穿孔法将重组质粒转染到耻垢分支杆菌mc^2155中。以SDS-PAGE及Western blot检测证实Rv1776c蛋白在重组耻垢分支杆菌内的表达。结果重组耻垢分支杆菌构建成功,生长曲线说明重组质粒不会影响耻垢分支杆菌的体外生长;SDSPAGE及Western blot检测证实Rv1776c在耻垢分枝杆菌内表达出相对分子量约56kD的Rv1776c蛋白。结论成功构建了Rv1776c基因的穿梭质粒pMV-Rv1776c,且该质粒在耻垢分枝杆菌内具有生物活性,为进一步研究其表达产物的功能提供基础。
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