京尼平交联羊膜生物支架的生物物理特性

作     者：尹燕锋 杨柳 涂秋芬 吕莎 管峥 苏文君 李云川 李兰 Yin Yanfeng;Yang Liu;Tu Qiufen;Lyu Sha;Guan Zheng;Su Wenjun;Li Yunchuan;Li Lan

作者机构：昆明市第一人民医院昆明医科大学附属甘美医院实验中心650011 昆明市第一人民医院昆明医科大学附属甘美医院眼科650011 西南交通大学材料学院成都610031 

出 版 物：《中华实验眼科杂志》 (Chinese Journal Of Experimental Ophthalmology)

年 卷 期：2018年第36卷第2期

页      面：107-112页

学科分类：1002[医学-临床医学] 100212[医学-眼科学] 10[医学] 

基　　金：云南省自然科学基金-昆明医科大学联合专项项目(2012FB109) 

主　　题：羊膜 交联剂/药物 应力 抗张强度 脐带间充质干细胞 生物相容性 京尼平 

摘      要：目的探讨京尼平交联羊膜作为生物支架的生物特性及可行性。方法获取新鲜脐带，采用贴壁法分离培养人脐带间充质干细胞（hUCMSCs）。采用流式细胞技术测定细胞表面标志物PE-CD34、PE-CD45、PE-CD90、FITC-105和FITC-Oct-4单克隆抗体及鉴定细胞。取第3代hUCMSCs进行成脂、成骨诱导培养，分别用茜素红和油红O染色鉴定。无菌条件下取健康剖宫产羊膜，将修剪的组织块固定于硝酸纤维素膜并按照京尼平质量浓度、交联温度和时间的不同分为12个组，分析质量分数0.5%、1%京尼平在37 ℃、45 ℃条件下交联羊膜24、36和48 h后羊膜的最大拉伸位移和最大载荷。将hUCMSCs分为hUCMSCs组、新鲜羊膜组（孔板中铺上新鲜羊膜后加入hUCMSCs进行培养）、交联羊膜组、交联羊膜＋明胶组和明胶组，分别按照分组在培养孔中铺上相应物质对hUCMSCs进行培养，采用羟脯氨酸试剂盒检测各组交联羊膜中羟脯氨酸含量。于培养后第3天采用MTT法检测各组细胞增生值（吸光度，A值）以评估交联羊膜的生物相容性。结果与0.5%京尼平交联羊膜相比，1%京尼平交联羊膜最大拉伸位移减小[（8.31±0.43）mm与（4.49±0.37）mm]，差异有统计学意义（t＝6.785，P〈0.05）。0.5%京尼平在37 ℃和45 ℃条件下交联24 h羊膜最大拉伸位移分别为（9.89±1.09）mm和（5.39±0.59）mm，差异有统计学意义（t＝6.389，P〈0.05）；0.5%京尼平在37 ℃条件下交联24、36和48 h羊膜最大拉伸位移逐渐减小，但差异无统计学意义（P〉0.05）。与0.5%京尼平交联羊膜相比，1%京尼平交联羊膜最大载荷增大[（3.94±0.31）N与（5.19±0.27）N]，差异有统计学意义（t＝3.034，P〈0.05）。0.5%京尼平在45 ℃条件下交联24 h羊膜载荷明显高于37 ℃条件下，差异有统计学意义（t＝5.528，P〈0.05）。1%京尼平交联羊膜、0.5%京尼平交联羊膜和新鲜羊膜中羟脯氨酸质量分数分别为（1.28±0.36）、（2.03±0.49）和（2.11±0.10）mg/g，1%京尼平交联羊膜中羟脯氨酸质量分数明显低于0.5%京尼平交联羊膜和新鲜羊膜，差异均有统计学意义（均P〈0.05）。新鲜羊膜组、明胶组和hUCMSCs组培养3 d后细胞增生值均明显低于交联羊膜组和交联羊膜＋明胶组，差异均有统计学意义（均P〈0.05），交联羊膜组与交联羊膜＋明胶组间细胞增生值的差异无统计学意义（P〉0.05）。结论不同温度、不同交联时间和不同质量分数京尼平均影响交联羊膜的力学特性，交联羊膜的细胞毒性小，可塑性更好，有望作为人工角膜的载体支架。