小麦TaCIPK3与TaCBLs的互作分析

作     者：程西永 于仕佳 毕惠惠 毛伟伟 刘晓丹 罗肖艳 詹克慧 许海霞 Cheng Xiyong, Yu Shijia, Bi Huihui, Mao Weiwei ,Liu Xiaodan ,Luo Xiaoyan ,Zhan Kehui, Xu Haixia

作者机构：河南农业大学农学院河南省粮食作物协同创新中心省部共建小麦玉米作物学国家重点实验室郑州450002 

出 版 物：《分子植物育种》 (Molecular Plant Breeding)

年 卷 期：2018年第16卷第3期

页      面：696-705页

核心收录：

学科分类：09[农学] 0901[农学-作物学] 

基　　金：转基因生物新品种培育重大专项(2016ZX08002003-004) 973计划(2014CB138105)共同资助 

主　　题：小麦 TaCIPK3 TaCBLs 生物信息学分析 蛋白互作 酵母双杂交检测 

摘      要：植物类钙调磷酸酶B蛋白CBLs(Calcineurin B-like proteins)和CBL互作蛋白激酶CIPKs(CBL-interacting protein kinases)在应答非生物逆境的钙信号系统中起着重要作用。为了研究小麦TaCIPK3的互作调控网络,以普通六倍体小麦(Triticum aestivum)品种矮抗58的叶片c DNA为模板,PCR扩增获得TaCIPK3的编码序列。TaCIPK3基因开放阅读框(ORF)长1348 bp,编码447个氨基酸。生物信息学分析显示TaCIPK3的N-端催化结构域含有CIPK家族蛋白的典型激活环,C-端调节域含有该家族高度保守的24个氨基酸NAF基序,具有丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶的结构特征。利用酵母双杂交体系对TaCIPK3与TaCBL1、TaCBL2、TaCBL3、TaCBL4、TaCBL6、TaCBL7、TaCBL9进行相互作用鉴定,发现分别转化有p GADT7-TaCIPK3×p GBKT7-Ta CBL1、p GADT7-TaCIPK3×p GBKT7-Ta-CBL2、p GADT7-TaCIPK3×p GBKT7-Ta CBL3和p GADT7-TaCIPK3×p GBKT7-Ta CBL4的二倍体酵母菌能够在二缺培养基SD/-Trp/-Leu平板上长出白色菌落,同时这些二倍体菌株在四缺培养基SD/-Leu/-Trp/-Ade/-His/X-α-Gal/Ab A上能够长出淡蓝色菌落,表明下游的4个报告基因ADE2、HIS3、MEL1和AUR1-C被激活,因此说明TaCIPK3与TaCBL1、TaCBL2、TaCBL3和TaCBL4之间存在互作。本研究结果对进一步研究TaCIPK3的生物学功能以及与TaCBLs的互作网络具有一定的参考作用。