高粱幼叶细胞悬浮系的建立

作     者：郝艳芳 王良群 刘勇 张微 杨伟 白鸿雁 武擘 Hao Yanfang;Wang Liangqun;Liu Yong;Zhang Wei;Yang Wei;Bai Hongyan;Wu Bo

作者机构：山西省农业科学院高粱研究所山西晋中030600 高粱遗传与种质创新山西省重点实验室山西晋中030600 

出 版 物：《作物杂志》 (Crops)

年 卷 期：2018年第1期

页      面：35-40,F0002页

学科分类：09[农学] 0901[农学-作物学] 

基　　金：山西省科技厅攻关项目(20150311003-2) 山西省农业科学院农业科技创新研究课题(ZDSYS1506) 山西省农业科学院育种基础项目(Yyzjc1405) 

主　　题：高粱 细胞悬浮系 活细胞率 近圆细胞率 细胞密度 

摘      要：以高粱无菌苗幼叶为试验材料,对颗粒状胚性愈伤组织的获得、细胞悬浮系的建立及影响悬浮细胞生长的主要因素进行了研究。结果表明:幼叶在MS(Murashige and Skoog)+2mg/L 2,4-D培养基上诱导出的愈伤组织,经2~3次继代筛选后获得了浅黄色、颗粒状胚性愈伤组织;胚性愈伤组织接种于液体培养基中,于25±1℃、黑暗条件下,经45~60d的悬浮震荡培养建立了高质量的细胞悬浮系,细胞生长曲线呈S型,细胞密度可达6.45×10~5~5.08×10~6个/mL以上,活细胞率可达72.76%,近圆细胞率可达87.50%;培养基的基本成分、激素种类和水平对悬浮细胞生长状态有很大的影响,相比1/2MS培养基,MS培养基为适宜的培养基,2,4-D对保持细胞系的稳定增殖至关重要,适宜的浓度为1mg/L;培养液中加入0.5mg/L KT或6-BA会造成悬浮液褐化,影响悬浮细胞的生长;最适宜的细胞悬浮培养基为L2培养基(MS+1mg/L 2,4-D,30g/L蔗糖,pH5.8),震荡培养转速为110~120r/min,继代周期为7d,新旧培养基的接种比例为2∶1。