简易型同源重组载体pAmpR-NeoR的构建和效果检测

作     者：王英泽 王巧兰 曹晴晴 付育 刘畅 王晨晨 杜朝 WANG Yingze;WANG Qiaolan;CAO Qingqing;FU Yu;LIU Chang;WANG Chenchen;DU Chao

作者机构：河北科技大学生物科学与工程学院河北石家庄050018 

出 版 物：《华北农学报》 (Acta Agriculturae Boreali-Sinica)

年 卷 期：2017年第32卷第6期

页      面：25-30页

核心收录：

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 090102[农学-作物遗传育种] 

基　　金：国家自然科学基金面上项目(81171455) 国家自然科学基金青年项目(31100715 81402305) 河北省自然科学基金青年项目(C2013208005) 河北省高等学校科学技术研究项目(QN2014043) 河北科技大学五大平台开放基金课题 中国科学院纳米生物效应与安全性重点实验室开放课题资助项目(NSKF201605) 

主　　题：基因编辑 同源重组载体 同尾酶 

摘      要：为了构建能够灵活用于CRISPR/Cas9系统进行基因编辑的供体质粒,利用pcDNA3.1(+)-HA-His为模板,分别扩增了其AmpR-ori片段和NeoR片段,然后连接,构建了一个简易型同源重组载体pAmpR-NeoR。载体的正选择标记NeoR基因两侧分别引入了BamHⅠ和XhoⅠ作为克隆位点,用于左、右同源臂的克隆。利用这一载体,构建了针对小鼠FasL基因的供体质粒。结果显示靶序列发生基因编辑。pAmpR-NeoR以同尾酶作为多克隆位点,这使其具有良好的扩展性、灵活性和序列通用性,便于根据需要进一步改造,以满足具体试验的不同需求。