大鼠骨髓间充质干细胞来源的胞外囊泡分离和鉴定

作     者：葛锁华 马永宾 芮星 张俊华 汪雪峰 苏建华 GE Suohua;MA Yongbin;RUI Xing;ZHANG Junhua;WANG Xuefeng[2.];SU Jianhua[1.]

作者机构：江苏大学附属金坛医院江苏金坛213200 江苏大学附属医院江苏镇江212001 

出 版 物：《细胞与分子免疫学杂志》 (Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology)

年 卷 期：2017年第33卷第10期

页      面：1381-1384页

核心收录：

学科分类：0710[理学-生物学] 1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 07[理学] 09[农学] 100102[医学-免疫学] 071007[理学-遗传学] 0901[农学-作物学] 090102[农学-作物遗传育种] 10[医学] 

基　　金：江苏省社会发展项目(BE2017697) 江苏省"六大人才高峰"项目(WSN-009) 江苏省自然科学基金(BK20141295) 江苏省"333工程"项目(BRA2014172) 镇江市社会发展项目(SH2015033) 镇江市重点医学人才(2014) 江苏大学附属医院科技项目(jdfyRC2015010) 江苏省"六个一"工程(LGY2016055) 江苏大学医学临床科技发展基金(JLY20160081) 

主　　题：骨髓间充质干细胞 胞外囊泡 分离 鉴定 

摘      要：目的探讨大鼠骨髓间充质干细胞来源的胞外囊泡(BMSC-EV)的分离、鉴定及-80℃冻存对BMSC-EV膜结构完整性的影响。方法应用超高速离心法从大鼠BMSC培养上清液(BMSC-CS)中分离并纯化EV,扫描电镜和透射电镜观察其大小和形态;Western blot法检测EV标志性蛋白CD63的表达;-80℃冻存后,不同时间段通过透射电镜观察EV膜结构的完整性。结果扫描电镜观察BMSC表面附着有大量膜结构的EV,形态呈圆形或椭圆形,直径约50~1000 nm;透射电镜观察BMSC-EV具有膜结构,形态和大小与扫描电镜结果一致;Western blot结果表明,BMSC-EV表达CD63;-80℃冻存后,在第1个月和第3个月分别通过透射电镜观察BMSC-EV膜结构完整,而冻存第6个月BMSC-EV膜结构破裂。结论成功提取了BMSC-EV,且随着冻存时间的延长,其膜结构完整性降低。