表达羊口疮病毒B2L基因重组腺病毒的构建及鉴定

作     者：王勇 杨侃侃 王元红 俞赵荣 潘飞 崔佣楸 苏莉 钟灵毓 徐前明 蒋书东 李永东 WANG Yong;YANG Kankan;WANG Yuanhong;YU Zhaorong;PAN Fei;CUI Yongqiu;SU Li;ZHONG Lingyu;XU Qianming;JIANG Shudong;LI Yongdong

作者机构：安徽农业大学动物科技学院安徽合肥230036 宁波市疾病预防控制中心浙江宁波315010 

出 版 物：《扬州大学学报（农业与生命科学版）》 (Journal of Yangzhou University：Agricultural and Life Science Edition)

年 卷 期：2017年第38卷第3期

页      面：6-10页

学科分类：090601[农学-基础兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(31602063) 安徽省自然科学基金资助项目(1508085QC60) 安徽农业大学稳定和引进人才科研项目(YJ2015-16) 

主　　题：羊口疮病毒 B2L基因 重组腺病毒 构建 鉴定 

摘      要：为构建表达羊口疮病毒(ORFV)B2L基因的重组腺病毒,提取实验室保存的ORFV AH-F10临床分离株的病毒核酸,PCR扩增B2L基因,将其克隆至穿梭载体中,再将重组穿梭质粒pHBAd-ORFV-B2L与骨架载体质粒pHBAdBHGloxΔE1利用脂质体共转染HEK293细胞,转染后48h收获包装成功的重组腺病毒rAd-ORFV-B2L,对rAdORFV-B2L进行病毒滴度测定及遗传稳定性鉴定。结果表明:构建获得的重组腺病毒rAd-ORFV-B2L病毒滴度达到107.9 TCID50·μL^(-1)。Western-blot检测结果表明rAd-ORFV-B2L在体外能够表达B2L蛋白,且能够与ORFV多抗血清发生特异性反应。RT-PCR检测结果表明,连续传代的rAd-ORFV-B2L能够稳定表达外源蛋白B2L。该研究为后续腺病毒疫苗的动物保护试验奠定基础。