携带恶性疟原虫ama1基因的重组MVA构建及免疫性分析

作     者：李珣 缪军 薛采芳 刘忠湘 雷俊川 王宪锋 

作者机构：第四军医大学病原生物学教研室西安710032 

出 版 物：《中华微生物学和免疫学杂志》 (Chinese Journal of Microbiology and Immunology)

年 卷 期：2003年第23卷第10期

页      面：792-795页

核心收录：

学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100102[医学-免疫学] 10[医学] 

基　　金：军队医药卫生基金课题 (0 1L0 95 ) 联合国发展计划/世界银行 /世界卫生组织热带病研究与培训特别规划 (TDR)基金课题 (A3 0 12 5 ) 

主　　题：恶性疟原虫 ama1 基因重组 MVA构建 免疫性 顶端膜抗原1 安卡拉痘苗病毒 

摘      要：目的 构建稳定表达恶性疟原虫 (Pf)顶端膜抗原 1(AMA1)的重组改良安卡拉痘苗病毒 (MVA) ,对其诱导小鼠免疫应答的特性进行分析。方法 构建包含PfAMA1编码基因的重组载体pⅢdHR .ssp E ,转染MVA感染的BHK2 1细胞 ,经同源重组插入MVA基因组的deletionⅢ位点 ,利用宿主范围基因k1l在RK13细胞中对rMVA进行瞬时筛选 ,用获得的rMVA E(K1L)感染BHK2 1并进行传代 ,经内部同源重组去除k1l后获得rMVA E。采用PCR、IFA和Westernblot对rMVA E的基因组序列和重组抗原的表达情况进行鉴定。用不同剂量的rMVA E经腹腔接种免疫BALB c小鼠 ,ELISA检测特异性抗体应答的水平并分析IgG亚类 (IgG1和IgG2a) ,取脾细胞用重组抗原在体外进行刺激增殖。结果 获得了可稳定表达PfAMA1的重组MVA ,经 3次腹腔接种不同剂量 (10 7～ 10 8TCID50 )后的rM VA E诱导BALB c小鼠产生了水平相当 (P 0 .1)的抗AMA1抗体 ,其IgG亚类以IgG2a为主 ,各免疫组脾细胞在体外对AMA1抗原的再刺激均产生了明显的回忆应答。结论 成功构建了携带Pfama1基因的重组MVA。rMVA E可诱导小鼠产生AMA1特异的免疫应答。