精子相关抗原6(SPAG6)与TCTE3蛋白间相互作用探讨

作     者：双超凡 柳赟昊 刘晙玭 闵洁 李梦颖 桂媛 黄金宇 张玲 张志兵 Shuang Chaofan;Liu Yunhao;Liu Junpin;Min Jie;Li Mengying;Gui Yuan;Huang Jinyu;Zhang Ling;Zhang Zhibing

作者机构：武汉科技大学医学院公共卫生学院劳动卫生与环境卫生学教研室武汉430065 弗吉利亚联邦大学妇产科学系弗吉利亚里士满23298 

出 版 物：《重庆医科大学学报》 (Journal of Chongqing Medical University)

年 卷 期：2017年第42卷第8期

页      面：948-952页

核心收录：

学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金面上资助项目(编号:81671514 81571428) 国家自然科学基金青年资助项目(编号:81300536) 湖北省卫计委资助项目(编号:WJ2015Q026) 

主　　题：男性不育 精子相关抗原6 T复合体相关睾丸表达3 酵母双杂交 蛋白表达 

摘      要：目的:探讨精子相关抗原6(sperm associated antigen 6,Spag6)和T复合体相关睾丸表达3(T-complex associated testis expressed 3,TCTE3)之间的相互作用。方法:PCR法观察Tcte3在雄性小鼠各组织中的表达;以小鼠睾丸c DNA为模板,扩增Tcte3序列,构建Tcte3/p GADT7、Tcte3/p EGFPN2重组质粒;以Tcte3/p EGFPN2转染CHO细胞和COS-1细胞,免疫荧光染色及Western blot检测TCTE3在细胞中的定位和表达;以Spag6/p GBKT7和Tcte3/p GADT7进行酵母双杂交实验,提取酵母蛋白后采用Western blot检测TCTE3与SPAG6之间是否存在直接的相互作用。结果:Tcte3在睾丸、脑、肝、肾、肺、脾、肌肉中均有表达;酶切和测序鉴定证实Tcte3/p GADT7和Tcte3/p EGFPN2重组质粒均构建成功;体外实验发现TCTE3主要在CHO和COS-1细胞质中表达,当与SPAG6质粒共转染后,TCTE3被募集至细胞微管中表达;酵母双杂交实验显示TCTE3/SPAG6组合后,在缺少SD/-Leu/-Trp/-His的培养板上有菌落生成,Western blot显示菌落中TCTE3、SPAG6蛋白表达显著,分子量正确。结论:精子相关抗原SPAG6与TCTE3之间存在直接的相互作用,SPAG6可募集TCTE3至细胞微管中表达。