ADAM9基因真核表达质粒的构建及表达

作     者：乔纯忠 卞倩 戚宇华 焦永军 李俊生 QIAO Chun-zhong;BIAN Qian;QI Yu-hua;JIAO Yong-jun;LI Jun-sheng

作者机构：东南大学医学院江苏南京210009 江苏省疾病预防控制中心病原微生物研究所江苏南京210009 

出 版 物：《东南大学学报（医学版）》 (Journal of Southeast University(Medical Science Edition))

年 卷 期：2011年第30卷第3期

页      面：482-485页

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 090102[农学-作物遗传育种] 10[医学] 

基　　金：江苏省自然科学基金资助项目(BK2007106) 

主　　题：去整合素金属蛋白酶9 真核表达载体 293T 免疫印记 

摘      要：目的:构建人源性去整合素金属蛋白酶9(ADAM9)基因真核表达载体并表达其编码蛋白(转染293T细胞)。方法:利用包含ADAM9全长编码核酸序列的质粒PCR4-TOPO作为模板,用PCR扩增其核心编码区,将其克隆至PMD18-TVector中构建PMD18-T-ADAM9质粒,同时双酶切PMD18-T-ADAM9及PXJ40-HA后构建PXJ40-HA-ADAM9真核表达载体,经酶切鉴定及测序后将载体转染至293T细胞中,通过免疫印记法检测ADAM9蛋白的表达。结果:经过双酶切和测序结果鉴定PXJ40-HA-ADAM9载体构建成功,经过West-ern blot法证实ADAM9基因表达。结论:成功克隆ADAM9基因并构建其真核表达载体,该载体的构建为后期建立稳定表达ADAM9细胞模型,并稳定表达ADAM9蛋白,为进行ADAM9功能研究提供可能。