猪细小病毒7型SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测方法的建立

作     者：孙文超 韩继成 解长占 张萍 张金勇 曹亮 崔卓栋 靖杰 温树波 肖朋朋 南福龙 张赫 庄忻雨 鲁会军 金宁一 SUN Wen-chao;HAN Ji-cheng;XIE Chang-zhan;ZHANG Ping;ZHANG Jin-yong;CAO Liang;CUI Zhuo-dong;JING Jie;WEN Shu-bo;XIAO Peng-peng;NAN Fu-long;ZHANG He;ZHUANG Xin-yu;LU Hui-jun;JIN Ning-yi

作者机构：广西大学动物科技学院广西南宁530004 军事医学科学院军事兽医研究所吉林长春130122 温州大学病毒学研究所浙江温州325035 吉林农业大学动物科技学院吉林长春130118 吉林大学动物科技学院吉林长春130062 

出 版 物：《中国预防兽医学报》 (Chinese Journal of Preventive Veterinary Medicine)

年 卷 期：2017年第39卷第8期

页      面：641-644页

核心收录：

学科分类：090601[农学-基础兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

基　　金：国家高技术研究与中国发展计划(863计划)(2011AA10A208) 

主　　题：猪细小病毒7型 荧光定量PCR 检测方法 

摘      要：为建立猪细小病毒7型(PPV7)的快速定量检测方法,本研究根据PPV7(KU563733.1)基因序列设计一对特异性引物,扩增155 bp的PPV7衣壳蛋白基因,构建重组质粒pClon007-PPV7,以其作为标准品建立了PPV7的SYBR GteenⅠ荧光定量PCR检测方法。结果显示,该方法在5.00×10~9拷贝/μL^5.00×10~3拷贝/μL范围内呈良好的线性关系。该方法对猪圆环病毒2型、猪繁殖与呼吸综合征病毒、伪狂犬病毒、乙脑病毒、口蹄疫病毒常见病原的检测均无特异性扩增,仅PPV7出现特异性扩增;该方法检测灵敏度可达5.00×10~1拷贝/μL;批内和批间变异系数均低于1%,具有较高的重复性和稳定性。对临床样品的检测结果显示,所建立的荧光定量PCR阳性检测率为71.88%,比普通PCR法检测的阳性率提高了约4.55%。该研究方法的建立为PPV7提供了一种新的快速定量检测技术。