创伤性脑损伤后大鼠脑组织miRNA-9表达变化及意义

作     者：吴精川 李辉 何骏驰 钟建军 张洪荣 黄志坚 孙晓川 WU Jingchuan;LI Hui;HE Junchi;ZHONG Jianjun;ZHANG Hongrong;HUANG Zhijian;SUN Xiaochuan

作者机构：重庆医科大学附属第一医院神经外科重庆400016 

出 版 物：《第三军医大学学报》 (Journal of Third Military Medical University)

年 卷 期：2017年第39卷第14期

页      面：1458-1463页

核心收录：

学科分类：0710[理学-生物学] 100208[医学-临床检验诊断学] 1002[医学-临床医学] 07[理学] 071007[理学-遗传学] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金面上项目(81571159)~~ 

主　　题：创伤性脑损伤 miRNA 内皮细胞 血管重塑 

摘      要：目的观察创伤性脑损伤(traumatic brain injury,TBI)后大鼠损伤皮质区miRNA-9的表达变化规律,探讨其对脑微血管内皮细胞的保护作用。方法选取成年雄性SD大鼠60只制作控制性皮质撞击损伤模型(controlled cortical impact,CCI),分别应用荧光定量PCR和Western blot检测伤后6 h及1、3、7、14、28 d各时间点伤灶周围组织中miRNA-9及CD31的表达情况。培养原代大鼠脑微血管内皮细胞,将内皮细胞分为正常组、损伤模型组[用依托泊苷(etoposide,ETO)损伤]、miRNA-9过表达损伤模型组、空转染损伤模型组,应用CCK-8检测各组细胞活力;应用Western blot检测各组B细胞淋巴瘤/白血病-2蛋白(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)、B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X,Bax)、活化半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶-3蛋白(cleaved cysteinyl aspartate specific proteinase 3,cl-caspase-3)表达水平。结果 (1)脑创伤后伤灶周围区域miRNA-9表达明显增加,于伤后第14天达高峰(P0.01);内皮细胞标志物CD31蛋白表达水平从伤后第3~28天持续高于正常组(P0.05);(2)内皮细胞建模转染后,qPCR结果提示损伤模型组较正常组miRNA-9表达显著降低(P0.01),但miRNA-9过表达损伤模型组miRNA-9表达显著高于损伤模型组(P0.01);CCK-8结果同样显示miRNA-9过表达损伤模型组细胞活力明显高于损伤模型组(P0.01);(3)相比于损伤模型组,miRNA-9过表达损伤模型组内皮细胞Bcl-2蛋白表达增加(P0.01),Bcl-2/Bax值增加(P0.05),但Bax蛋白、cl-caspase-3蛋白表达降低(P0.05)。结论创伤性脑损伤后伤灶周围区域miRNA-9表达增多且过表达miRNA-9可提高依托泊苷诱导损伤的内皮细胞活力,提示脑创伤后miRNA-9表达增加有助于脑血管重塑的发生。