小鼠酪氨酸酶siRNA的体外有效性实验研究

作     者：贾秀华 黄冰 庄菁 朱翔 廖东江 葛坚 林少春 徐晓平 彭展 JIA Xiu-hua;HUANG Bing;ZHUANG Jing;ZHU Xing;LIAO Dong-jiang;GE Jian;LIN Shao-chun;XU Xiao-ping;PENG Zhan

作者机构：中山大学中山眼科中心眼科学国家重点实验室广州510060 中山大学附属第三医院广州510630 

出 版 物：《中国比较医学杂志》 (Chinese Journal of Comparative Medicine)

年 卷 期：2008年第18卷第12期

页      面：10-16,I0003页

学科分类：10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金委员会专项基金/主任基金(No.30640047) 广东省科学事业/科研条件计划项目(No.2006B60101058) 

主　　题：RNAi 酪氨酸酶 B16细胞 

摘      要：目的通过RNAi技术,筛选出针对小鼠酪氨酸酶的有效siRNA,为酪氨酸酶异常等人类疾病的动物模型制作及该类疾病的预防和治疗奠定基础。方法利用针对小鼠酪氨酸酶mRNA的不同干扰片段分别转染小鼠黑色素瘤B16细胞系,同时采用阴性干扰片段转染作为阴性对照,单纯脂质体转染作为空白对照。使用实时荧光定量PCR、酪氨酸酶活性测定和黑色素含量测定3种方法分3个时间点于转染后24、48、72 h对不同组的细胞干扰结果进行检测。结果siNM-011661-001、siNM-011661-002、siNM-011661-003三个干扰片段均能在转染后发挥一定的干扰作用,其中siNM-011661-001在转染后发挥的干扰效果最强,在降低酪氨酸酶基因mRNA表达、酶活性、以及黑素含量三方面分别能起到82.81%、64.73%、52.53%的抑制作用。结论针对小鼠酪氨酸酶的siNM-011661-001序列能在转录后水平发挥高效、稳定的基因沉默作用,是发挥RNAi的优势序列。