水稻DEAD-box RNA解旋酶OsRH37超表达和RNAi转基因水稻的获得及其亚细胞定位分析

作     者：张超 高芳銮 郑璐平 丁作美 杨振 李阳 吴建国 吴祖建 

作者机构：福建农林大学植物病毒研究所/福建省植物病毒学重点实验室 

出 版 物：《农业生物技术学报》 (Journal of Agricultural Biotechnology)

年 卷 期：2015年第23卷第11期

页      面：1410-1420页

核心收录：

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 0901[农学-作物学] 090102[农学-作物遗传育种] 

基　　金：国家自然科学基金(No.31272018和No.31201491) 福建省自然科学基金(No.2013J01089) 福建省高校杰出青年科研人才计划(No.JA3091) 

主　　题：DEAD-box RNA解旋酶(RH) OsRH37 超表达 RNAi 亚细胞定位 

摘      要：DEAD-box RNA解旋酶(RNA helicase,RH)普遍存在于绝大多数的生物体中,参与到RNA新陈代谢的各个方面。本研究从日本晴水稻(Oryza sativa ***)叶片RNA中成功克隆DEAD-box RNA解旋酶基因Os RH37的CDS全长序列。序列比对发现,Os RH37的氨基酸序列与拟南芥(Arabidopsis thaliana)DEAD-box RNA解旋酶17、37和52的氨基酸序列一致性70%,与来自于不同动物体内DEAD-box RNA解旋酶的氨基酸序列一致性普遍60%。构建了Os RH37的水稻超表达和RNAi干扰载体,通过水稻遗传转化体系成功转化水稻获得Os RH37超表达和RNAi T0转基因水稻阳性植株。sq RT-PCR分析表明,与野生型日本晴水稻中Os RH37表达量相比,Os RH37超表达T1转基因水稻中Os RH37表达量均明显上调,而Os RH37 RNAi转基因水稻中Os RH37的表达量均显著下调。构建青色荧光蛋白的瞬时表达载体CFP-Os RH37,经农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)接种导入本氏烟(Nicotiana benthamiana)叶片表皮细胞,激光共聚焦显微观察结果显示,Os RH37蛋白定位于细胞核、染色质核仁和细胞质中的点状结构。Os RH37的生物信息学分析、超表达和RNAi转基因水稻的获得以及亚细胞定位分析将为研究其在水稻生长发育和胁迫反应中发挥的重要作用提供线索。