一种通过GFP结合蛋白强化三分子荧光互补方法的建立

作     者：谢亮 王琼 程小玲 彭静 王美 刘梦雯 屈品均 辛化伟 Liang Xie;Qiong Wang;Xiaoling Cheng;Jing Peng;Mei Wang;Mengwen Liu;Pinjun Qu;Huawei Xin

作者机构：武汉科技大学生物医学研究院湖北武汉430070 

出 版 物：《生物技术》 (Biotechnology)

年 卷 期：2017年第27卷第3期

页      面：252-258页

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 0901[农学-作物学] 090102[农学-作物遗传育种] 

基　　金：国家自然科学基金项目("端粒与端粒酶联系的分子调控机制及其在抗肿瘤中的潜在应用" No.31371385) 

主　　题：super-folder GFP GFP结合蛋白 三分子荧光互补技术 

摘      要：[目的]将改造后的GFP(super-fold GFP,简写为sf GFP)作为三分子荧光互补技术的基础,通过应用多种GFP结合蛋白(GFP binding protein,GBP),筛选并验证可强化荧光互补作用的GFP结合蛋白。[方法]将sf GFP拆分为三部分(GFP1-9,GFP10和GFP11),建立GFP三分子荧光互补技术体系,利用多种GFP结合蛋白对GFP三分子荧光互补技术进行试验,通过观察荧光变化筛选可强化荧光互补作用的GFP结合蛋白。[结果]发现DARPin-GFP、GFP-enhancer和Nbsf GFP这三种GFP结合蛋白能够与GFP共定位并对GFP三分子重组装有增强效果,其中GFP-enhancer与Nbsf GFP增强效果约为原荧光强度4倍,DARPin-GFP约为2倍。[结论]GFP结合蛋白可作为一种新手段,使以GFP三分子荧光互补技术为基础的蛋白质-蛋白质相互作用研究的检测效率和灵敏度得到提高。