干扰素调节因子-3启动子区序列分离、鉴定及在人类胚胎肾-293细胞中启动活性分析

作     者：任伟 徐华国 陆超 周国平 REN Wei;XU Hua-gao;LU Chao;ZHOU Guo-ping

作者机构：南京医科大学第一附属医院儿科南京210029 

出 版 物：《实用儿科临床杂志》 (Journal of Applied Clinical Pediatrics)

年 卷 期：2009年第24卷第17期

页      面：1344-1345,1348页

学科分类：1002[医学-临床医学] 100210[医学-外科学(含：普外、骨外、泌尿外、胸心外、神外、整形、烧伤、野战外)] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金项目资助(30570863 30872804) 江苏省科教兴卫工程医学重点人才项目资助(RC2007050) 江苏省自然科学基金项目资助(BK2007244) 

主　　题：干扰素调节因子-3 启动子 启动活性 

摘      要：目的构建表达干扰素调节因子-3(IRF-3)基因转录起始位点上游启动子的表达质粒,转染人类胚胎肾(human embryonic kidney,HEK)-293细胞,评价其启动子活性。方法以人全血细胞总DNA为模板,PCR扩增IRF-3转录起始位点上游1 000 bp的启动子区片段。亚克隆此片段至无启动子活性的pGL-3基本载体荧光素酶报告基因上游的多克隆位点,构建含IRF-3启动子的重组报告质粒。转染HEK-293细胞,行荧光素酶活性检测,计算相对活性单位(RLU)。生物信息学分析转录因子结合位点。结果酶切,测序鉴定证实成功构建含有IRF-3基因转录起始位点上游1 000 bp的启动区的表达质粒。IRF-3的启动子与正常的pGL-3基本质粒比较,其RLU增加了42.2倍。其上游启动子区序列中含多个转录因子结合序列如GATA-1、Sp1和E2F等。结论IRF-3转录起始位点上游序列在HEK-293细胞中具有较强的启动活性。