GSTZ1重组腺病毒的构建及影响肝癌细胞迁移能力的研究

作     者：杨翼 李晶晶 梁利 高庆祝 郑亚秋 潘娥 汪凯 唐霓 单幼兰 Yang Yi;Li Jingjing;Liang Li;Gao Qingzhu;Zheng Yaqiu;Pan E;Wang Kai;Tang Ni;Shan Youlan

作者机构：重庆医科大学附属第二医院传染科重庆医科大学感染性疾病分子生物学教育部重点实验室重庆400016 

出 版 物：《重庆医科大学学报》 (Journal of Chongqing Medical University)

年 卷 期：2017年第42卷第7期

页      面：821-827页

核心收录：

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(编号:81602417 81572683 81371827) 重庆市科委基础与前沿重点资助项目(编号:cstc2015jcyj BX0011) 重庆高校创新团队建设计划资助项目(编号:CXTDX201601015) 

主　　题：GSTZ1 SMMC-7721细胞 粘附连接信号通路 肝癌 细胞迁移 

摘      要：目的:构建人谷胱甘肽-S-转移酶Z1(glutathione S-transferase zeta 1,GSTZ1)重组腺病毒,并初步研究GSTZ1调控粘附连接信号通路(adhesion junction pathway)靶基因SMAD3、IGF1R等影响肝癌细胞的迁移能力。方法:PCR扩增GSTZ1 cDNA序列并克隆到腺病毒载体pAd Track-TO4,构建重组腺病毒质粒p Ad Track-GSTZ1,将重组质粒用Lipofectamine 2000转染至HEK293细胞中,包装、扩增成高滴度重组腺病毒AdGSTZ1。首先,将SMMC-7721细胞设为3组:Mock组、AdGFP组和AdGSTZ1组,Mock组为空白对照组,AdGFP组为感染腺病毒AdGFP的对照组,AdGSTZ1组为感染腺病毒AdGSTZ1的实验组。然后,通过Transwell实验和MTS实验观察其对肝癌细胞迁移增殖能力的影响,进一步经qRT-PCR及Western blot技术研究GSTZ1通过调控粘附连接信号通路关键分子影响肝癌细胞的迁移。结果:成功构建了高滴度重组腺病毒AdGSTZ1,经Western blot鉴定GSTZ1在SMMC-7721细胞中的表达。Transwell实验结果表明,AdGSTZ1组与Mock组及AdGFP组相比,能够明显抑制人肝癌细胞的迁移能力;与Mock组相比,抑制率为(68.10±1.63)%(P=0.000),与AdGFP组相比,抑制率为(50.70±0.99)%(P=0.000)。MTS实验结果表明,AdGSTZ1组在72 h和96 h的吸光度值分别为(1.13±0.08)和(1.28±0.07),AdGFP组72 h和96 h的吸光度值分别为(1.28±0.03)和(1.45±0.03),AdGSTZ1组在96 h的吸光度值与对照组相比明显降低,差异有统计学意义(P0.01)。另外q RT-PCR及Western blot结果显示,与Mock组和AdGFP组相比,AdGSTZ1感染细胞内粘附连接信号通路中靶基因SMAD3、IGF1R等的表达明显降低。q RT-PCR结果显示,AdGSTZ1组与AdGFP组相比,TGFBR1相对表达量为(0.58±0.13)(t=4.609,P=0.010),SMAD3相对表达量为(0.51±0.08)(t=8.030,P=0.000),ERBB2相对表达量为(0.46±0.09)(t=9.384,P=0.000),IGF1R相对表达量为(0.45±0.02)(t=14.480,P=0.000),FARP2相对表达量为(0.37±0.13)(t=7.082,P=0.028)。Western blot表明,SMAD3组中,AdGFP组的蛋白相对表达量为(0.96±0.18),AdGSTZ1实验组的蛋白相对表达量(0.39±0.01)(P=0.001)。IGF1R组中,AdGFP组的蛋白相对表达量为(0.97±0.05),AdGSTZ1实验组的蛋白相对表达量(0.44±0.02)(P=0.000)。结论:GSTZ1通过调控粘附连接信号通路相关靶基因的表达抑制肝癌细胞的迁移。