乳酸菌红色荧光蛋白融合表达系统的构建

作     者：寇田田 北婷婷 李晨 许沙 田洪涛 罗云波 Kou Tiantian Bei Tingting Li Chen Xu Sha Tian Hongtao Luo Yunbo

作者机构：河北农业大学食品科技学院河北保定071001 河北省农产品加工工程技术研究中心河北保定071001 中国农业大学食品科学与营养工程学院北京100083 

出 版 物：《中国食品学报》 (Journal of Chinese Institute Of Food Science and Technology)

年 卷 期：2017年第17卷第3期

页      面：235-240页

核心收录：

学科分类：08[工学] 082203[工学-发酵工程] 0822[工学-轻工技术与工程] 

基　　金：国家自然科学基金项目(31301520) 河北省自然科学基金项目(C2016204129) 国家"863"计划项目(2006AA10Z317) 

主　　题：乳酸菌 融合表达载体 红色荧光蛋白 淀粉酶 

摘      要：目的:构建以红色荧光蛋白基因(dsred2)为标记的乳酸菌融合表达系统p MG36e-dsred2,并以α-淀粉酶(amy)为报告基因实现融合基因dsred2-amy在乳酸菌内的融合表达。方法 :通过PCR的方法以质粒p PIC9kdsred2为模板扩增得到dsred2基因的全部编码区序列,并将其连接到克隆型载体p MG36e上,得到重组载体p MG36e-dsred2。以地衣芽孢杆菌基因组为模板,扩增只带有起始密码子而不带有终止密码子的α-淀粉酶基因(amy),将其连接到克隆型载体p MG36e-dsred2上,获得融合表达载体p MG36e-dsred2-amy。最后将该载体电转化干酪乳杆菌,利用荧光显微镜观察红色荧光基因表达情况,用淀粉平板检测淀粉酶活性。结果:通过PCR的方法分别扩增到大小为694bp的红色荧光蛋白基因(dsred2)和大小为1 554 bp的淀粉酶基因(amy)。将获得的两个基因片段进行测序,结果与NCBI数据库进行对比,dsred2基因的匹配率为100%,amy基因同源性为99.54%。成功构建了乳酸菌表达系统p MG36e-dsred2及融合表达载体p MG36e-dsred2-amy。在荧光显微镜下观察菌体有荧光且淀粉平板上有明显的透明圈。结论:融合表达载体的构建成功为乳酸菌在生物体内的定植、分布、存活等研究提供了方法,也为研究外源蛋白在乳酸菌内的表达的分泌(细胞内、细胞壁、细胞外表达)、活性检测等奠定了基础。