BTB-cap′n′collar同源异构体1-siRNA对转化生长因子-β1诱导的小鼠肺成纤维细胞中抗氧化因子表达的影响

作     者：刘媛 郑毅 Liu Yuan Zheng Yi

作者机构：首都医科大学附属北京朝阳医院风湿免疫科100082 

出 版 物：《中华风湿病学杂志》 (Chinese Journal of Rheumatology)

年 卷 期：2017年第21卷第4期

页      面：225-230页

学科分类：1002[医学-临床医学] 100201[医学-内科学(含：心血管病、血液病、呼吸系病、消化系病、内分泌与代谢病、肾病、风湿病、传染病)] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金(81200513) 

主　　题：Bachl 小鼠 肺 成纤维细胞 氧化性应激 

摘      要：目的观察BTB-cap′n′collar（CNC）同源异构体1（Bachl）-siRNA腺病毒载体对TGF-β1诱导后的小鼠肺成纤维细胞（MLF）中抗氧化因子及纤维化相关细胞因子表达的影响。方法构建Bachl siRNA腺病毒载体及空病毒载体，5ng/ml TGF-β1处理MLF24h，分别感染空病毒载体及Bachl siRNA腺病毒载体。RT—PCR及蛋白印迹法分别检测细胞中Bach1、血红素加氧酶1（HO-1）、谷胱甘肽过氧化酶1（GPxl）及还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化还原酶1（NQ01）的mRNA和蛋白表达水平；ELISA检测细胞上清液中纤维化相关因子TGF-β1及IL-6的水平。多个组间的比较采用单因素方差分析，两两比较采用LSD检验。结果TGF-β1诱导后MLF中Bachl mRNA水平（2．127±0．089）和蛋白表达较空白对照组mRNA（1．000±0．067,t=-21．77，P〈0．01）及蛋白表达明显升高，细胞上清中纤维化相关因子TGF-β1（52±6）及IL-6（34±6）较空白对照组（26±4，t=-11．11，P〈0．01及20±5，t=-5．32，P〈0．01）的表达也明显升高；但抗氧化因子HO-1及GPx1的mRNA水平（0．403±0．040及0．567±0．112）和蛋白表达较对照组mRNA（1．000±0．181，t=25．57，P〈0．01及1．000±0．212，t=6．68，P〈0．05）和蛋白表达明显减低；BachlsiRNA处理后，MLF中Bachl mRNA水平（0．153±0．015）和蛋白表达较TGF-β1组及空载体组的mRNA水平（2．129±0．089及1．973±0．035，F=1835．95，P〈0．01）和蛋白表达明显降低；细胞上清中TGF-β1（26±3）和IL-6（11±3）的表达水平也较TGF-β1组（52±6及34±6）及空载体组（49±5及33±6）明显降低（F=22．25，P〈0．01及F=28．38，P〈0．01），但HO-1（3．303±0．294）和GPx1（1．840±0．231）mRNA水平和蛋白表达较TGF-β1组（0．403±0．040及0．567±0．112）及空载体组（0．353±0．057及0．667±0．090）明显升高（F=53．90，P〈0．01及F=526．25，P〈0．01）。结论沉默Bach1能够解除TGF-β1对MLF抗氧化作用的抑制效应及促纤维化效应，为CTD相关性间质性肺疾病（ILD）的氧化应激机制的研究及抗氧化治疗提供一定的实验依据。