HIV-1蛋白酶的表达、纯化及其抑制剂体外筛选方法的建立

作     者：王云华 王睿睿 杨柳萌 李健峰 徐维明 郑永唐 WANG Yun-hua;WANG Rui-rui;YANG Liu-meng;Li Jian-feng;XU Wei-ming;ZHENG Yong-tang

作者机构：中国科学院昆明动物研究所分子免疫药理学实验室 中国医学科学院医学生物学研究所云南昆明650231 

出 版 物：《中国病毒学》 (Virologica Sinica)

年 卷 期：2006年第21卷第2期

页      面：126-130页

核心收录：

学科分类：0710[理学-生物学] 1007[医学-药学(可授医学、理学学位)] 1002[医学-临床医学] 1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 10[医学] 

基　　金：国家高技术研究发展计划(2003AA219142) 国家"十五"科技攻关计划(2004BA719A14) 中国科学院知识创新工程(KSCX2-SW-216 KSCX1-SW-11) 云南省自然科学基金(2002C0066M) 云南省科技攻关计划(2004NG12) 

主　　题：HIV-1 蛋白酶 表达 纯化 抑制剂 

摘      要：从HIV-1IIIB病毒RNA经RT-PCR得到HIV-1蛋白酶编码序列,克隆到pet28a质粒中构建HIV-1蛋白酶表达载体。阳性克隆转染***21DE3,经IPTG诱导,蛋白酶以包涵体的形式表达,表达量占菌体总蛋白量的40%。包涵体经TritonX-100洗涤后溶解于8M尿素,溶解后的蛋白溶液经sephacyls-200H.R分子筛柱纯化后纯度达到90%以上,收集蛋白酶峰稀释复性并通过超滤进行浓缩。经检测,纯化的蛋白酶具有较高的活性。用荧光标记的蛋白酶底物检测不同浓度indinavir对蛋白酶活性的影响,表明该方法可以用于蛋白酶抑制剂的筛选。