小鼠MSTN shRNA可控表达载体构建及基因沉默效率研究

作     者：杨跃飞 祁钰钰 杨开典 齐传翔 鞠辉明 YANG Yuefei QI Yuyu YANG Kaidian QI Chuanxiang JU Huiming

作者机构：扬州大学兽医学院江苏扬州225009 

出 版 物：《扬州大学学报（农业与生命科学版）》 (Journal of Yangzhou University：Agricultural and Life Science Edition)

年 卷 期：2016年第37卷第4期

页      面：1-4页

学科分类：07[理学] 070205[理学-凝聚态物理] 08[工学] 080501[工学-材料物理与化学] 0805[工学-材料科学与工程（可授工学、理学学位）] 0703[理学-化学] 0702[理学-物理学] 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(31101683 31272405) 江苏高校品牌专业建设工程项目(PPZY2015B158) 江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心项目(2016-10) 

主　　题：肌肉生成抑制素 可控表达 shRNA 基因沉默 

摘      要：肌肉生成抑制素(MSTN)是肌肉发育的负调控因子。根据MSTN mRNA序列设计1对MSTN shRNA并构建整合型四环素诱导表达MSTN shRNA载体pSingle-tTS-MSTN shRNA-GFP。重组载体转染小鼠成肌细胞并经G418筛选,通过强力霉素(DOX)诱导细胞中MSTN shRNA表达,利用荧光显微镜观察细胞中GFP表达情况,利用实时荧光定量PCR(QRT-PCR)及Western blot检测MSTN mRNA及蛋白的表达水平。结果表明:经DOX诱导后,转染含MSTN shRNA重组载体细胞组MSTN mRNA相对表达水平比未经DOX诱导组及其他对照组细胞中降低70%左右,差异极显著(P0.05)。该研究成功构建了可控表达MSTN shRNA载体,并在细胞水平证明其有很好的基因表达及调控效率,为后续制备可控表达MSTN shRNA转基因小鼠,通过精细调控MSTN基因的表达为研究该基因在肌肉发育中的功能奠定基础。