家蚕二分浓核病毒在家蚕细胞中的体外拯救

作     者：张苗苗 马瑛 潘晓利 胡朝阳 李国辉 司亚运 邢亚丽 陈克平 姚勤 

作者机构：江苏大学生命科学研究院江苏镇江212013 

出 版 物：《生物工程学报》 (Chinese Journal of Biotechnology)

年 卷 期：2015年第31卷第1期

页      面：86-95页

核心收录：

学科分类：0710[理学-生物学] 0831[工学-生物医学工程（可授工学、理学、医学学位）] 1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 0906[农学-兽医学] 09[农学] 0836[工学-生物工程] 

基　　金：国家自然科学基金(Nos.3127250,31270192) 国家重点基础研究发展计划(973计划)(No.2012CB114604)资助~~ 

主　　题：病毒基因组片段 线性化共转染 BmN细胞 病毒拯救 

摘      要：家蚕二分浓核病毒(Bombyx mori bidensovirus,Bm BDV)是特异性感染家蚕中肠引起慢性浓核病症的致病原,基因组含有2套单链DNA分子(VD1和VD2),复制机制尚不清楚。为了能够在体外拯救出有感染性的病毒粒子,构建了Bm BDV的基因组全长的克隆质粒p MD18T-VD1和p UC-VD2,并通过酶切构建的克隆质粒来获得双链的基因组片段VD1和VD2,利用脂质体包埋的方法,线性化共转染Bm N细胞。提取转染后的Bm N细胞总DNA,经去甲基化处理后,通过PCR检测到病毒基因的复制;提取转染后的Bm N细胞和添食回感的家蚕中肠的总蛋白,分别进行蛋白质印记杂交检测,检测到病毒基因的表达。由此首次表明,该病毒线性化的基因组片段通过共转染Bm N细胞的方法,可以在体外条件下拯救出具有感染性的病毒粒子。