浑球红细菌 (Rhodobacter sphaeroides)中氢化酶正调节基因hupR的克隆及功能分析(英文)

作     者：徐冬青 吴永强 XU Dong Qing, WU Yong Qiang * ( Institute of Plant Physiology and Ecology, Shanghai Institute for Biological Science, the Chinese Academy of Sciences, Shanghai 200032, China )

作者机构：中国科学院上海生命科学研究院植物生理生态研究所 中国科学院上海生命科学研究院植物生理生态研究所 上海200032 

出 版 物：《生物化学与生物物理学报》 (Acta Biochimica Et Biophysica Sinica)

年 卷 期：2001年第33卷第6期

页      面：607-614页

核心收录：

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 090102[农学-作物遗传育种] 

基　　金：国家自然科学基金资助项目 No .39870 0 0 5~~ 

主　　题：Rhodobacter sphaeroides hup基因簇 hupR基因 转录 氢化酶 

摘      要：从光合细菌Rhodobactersphaeroides基因文库中分离出含有氢化酶基因簇 (hup)的粘粒cosmid 1后 ,亚克隆了R .sphaeroides的氢化酶调节基因hupR ,测定了hupR的核苷酸序列 ,并完成了氢化酶基因簇的部分物理图谱。实验结果表明 ,hupR基因全长 1476bp ,编码的HupR蛋白分子量约为 5 4.0 31kD (EMBL接受号 :AJ2 43734 )。与R .capsulatus中HupR相比 ,同源性高达 73%。同源性比较结果表明 ,它属于双组分调节系统中受体蛋白。hupR基因在E .coli中进行了体外表达 ,纯化后测定得到的HupR蛋白的分子量大小与hupR基因推测的分子量大小一致。通过双交换 ,将卡那霉素抗性基因插入hupR基因 ,获得丧失氢化酶活性的hupR-的突变株 ,KR5和KR7。hupS∷lacZ融合基因在野生型中的转录表达量是在该突变株中的 7～ 9倍。将hupR基因置于弱启动子 pfru下游 ,构建了质粒pNRC3,并将其导入hupR-的突变株 ,可使突变株重新获得氢化酶活性。以上结果说明 ,HupR蛋白对氢化酶的转录表达起着正调节作用。在HupR蛋白的磷酸化区域进行定点和缺失突变 ,不影响HupR激活氢化酶基因的表达 ,推测HupR蛋白是在非磷酸化的状态下起调节作用的。