人骨形态发生蛋白-9基因修饰SD大鼠骨髓间充质干细胞的建立研究

作     者：向晓波 周艳萌 蒋练 Xiang Xiaobo Zhou Yanmeng Jiang Lian

作者机构：遵义医学院附属口腔医院口腔外科贵州遵义563000 遵义医学院微生物与免疫学实验室贵州遵义563000 

出 版 物：《现代医药卫生》 (Journal of Modern Medicine & Health)

年 卷 期：2017年第33卷第6期

页      面：801-804页

学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 10[医学] 

基　　金：贵州省科研基金资助项目(黔科合J字LKZ03号) 

主　　题：骨髓 间质干细胞 转染 大鼠,Sprague-Dawley 骨形态发生蛋白质类 基因 

摘      要：目的建立人骨形态发生蛋白-9(BMP-9)基因转染SD大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs),并观察其在细胞内的表达。方法采用全骨髓细胞贴壁法分离出BMSCs,利用流式细胞仪检测CD44、CD90、CD45、CD34细胞表面标记物;通过脂质体转染法将p Double Ex-EGFP-BMP-9质粒、p Double Ex-EGFP质粒转染入SD大鼠BMSCs,利用荧光显微镜、荧光定量PCR及蛋白质印迹法检测BMP-9的转染效果。结果全骨髓贴壁培养法成功分离大鼠BMSCs,传代培养至第3代可获得较高纯度,CD44-FITC的阳性表达率为92.35%,CD90-FITC的阳性表达率为91.76%,CD34-PE的阳性表达率为2.68%,CD45-PE的阳性表达率为4.13%;荧光显微镜和倒置显微镜下观察,BMP-9基因修饰后细胞形态未发生变化;PCR检测发现p Double Ex-EGFP-BMP-9转染组中大量表达BMP-9基因,是p Double Ex-EGFP组的378 517.88倍;Western blotting结果显示,p Double Ex-EGFP-BMP-9组中大量表达BMP-9蛋白,p Double Ex-EGFP未见表达。结论全骨髓贴壁培养法可以成功分离BMSCs,BMP-9基因可以通过脂质体转染的方法转染入SD大鼠的BMSCs中并得到成功表达。