鹦鹉幼雏病毒结构蛋白VP1基因的克隆及原核表达

作     者：寇铮 陈绳亮 钟靖 李天宪 喻子牛 Kou Zheng;Chen Shengliang;Zhong Jing;Li Tianxian;Yu Ziniu

作者机构：华中农业大学农业微生物国家重点实验室 中国科学院武汉病毒研究所武汉430071 中国科学院武汉病毒研究所 

出 版 物：《华中农业大学学报》 (Journal of Huazhong Agricultural University)

年 卷 期：2004年第23卷第6期

页      面：593-596页

核心收录：

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 090102[农学-作物遗传育种] 

基　　金：湖北省科技攻关重点基金项目 (2 0 0 1AA2 0 1B0 1) 中国科学院知识创新项目 (KSCX2 SW 3 0 2 3 )资助 

主　　题：鹦鹉幼雏病病毒(BFDV) 结构蛋白(VP1) 克隆与原核表达 

摘      要：采用湖北省云梦县患鹦鹉幼雏病死亡的虎皮鹦鹉体内分离得到的鹦鹉幼雏病毒 (budgerigarfledglingdiseasevirus,BFDV) ,应用PCR方法获得BFDV主要结构蛋白基因 (VP1) ,克隆到 pMD18 T载体 ,构建重组质粒 pMD18T VP1并进行测序 ,结果显示 ,结构蛋白基因 (VP1)与BFDV欧美分离株的同源性为 96 %～ 99% ,表明VP1是BFDV保守基因 ;将VP1亚克隆到原核表达载体pET32 (+)b ,构建重组质粒 pET32 (+)b VP1,转化菌株BL2 1(DE3) ,诱导表达 ,经SDS PAGE和Western blot分析 ,克隆在his tag下游的结构蛋白基因获得了高效融合表达 ,表达的融合蛋白分子量约为 5 5kD。为建立快速、灵敏的鹦鹉幼雏病毒血清学检测方法以及研制基因工程疫苗提供了科学依据。