成年小鼠心脏c-kit^+干细胞的分离及诱导分化

作     者：文德重 周敏 薛松 姜爱侠 黄日太 WEN Dezhong ZHOU Min XUE Song JIANG Aixia HUANG Ritai

作者机构：上海交通大学医学院附属仁济医院上海200127 上海交通大学医学院附属儿童医学中心 

出 版 物：《山东医药》 (Shandong Medical Journal)

年 卷 期：2017年第57卷第7期

页      面：16-19页

学科分类：1002[医学-临床医学] 100201[医学-内科学(含：心血管病、血液病、呼吸系病、消化系病、内分泌与代谢病、肾病、风湿病、传染病)] 10[医学] 

基　　金：上海市科学技术委员会资助项目(134119a5602) 

主　　题：心脏干细胞 c-kit+干细胞 干细胞移植 缺血性心脏病 

摘      要：目的从成年小鼠心脏中分离、纯化c-kit+干细胞,并观察其诱导分化结果。方法取C57BL/6雄性小鼠3只,取心脏组织,将心脏解离成单个细胞。采用CD45磁珠、c-kit磁珠分选得到c-kit+干细胞。鉴定细胞纯度,观察细胞表型。观察所得心脏c-kit+干细胞球的形成情况,对其进行诱导分化,采用RT-PCR法观察诱导分化细胞血管平滑肌细胞的标志物α-SMA和sm-22α、血管内皮细胞标志物v WF、心肌细胞标志物c Tn T、心脏干细胞标志物c-kit,观察诱导分化的细胞表型。结果心脏c-kit+干细胞c-kit+纯度为89.3%,心脏干细胞表面表达c-kit抗体。原代c-kit+干细胞生长缓慢,传代后细胞生长较快,悬浮培养可形成心脏c-kit+干细胞球。与诱导第0天比较,诱导分化第14 d时心脏干细胞α-SMA、sm-22α、v WF、c Tn T mRNA相对表达量升高,c-kit mRNA相对表达量降低,P均0.05。心脏c-kit+干细胞在心肌细胞诱导分化培养基中培养14 d左右可见c Tn T阳性细胞。心脏干细胞在无LIF的培养基中培养14天可见v WF、α-SMA阳性细胞。结论成功从成年小鼠心脏分离心脏c-kit+干细胞,所得c-kit+干细胞c-kit+纯度高,可成功诱导分化为心肌细胞、血管平滑肌细胞及血管内皮细胞。