栉孔扇贝几丁质酶基因的克隆及功能鉴定
Cloning and mineralization-related functions of the chitinase gene in Chlamys farreri作者机构：清华大学生命科学学院
出 版 物：《水产学报》 (Journal of Fisheries of China)
年 卷 期：2017年第41卷第2期
页 面：189-197页
核心收录：
学科分类：0710[理学-生物学] 0830[工学-环境科学与工程（可授工学、理学、农学学位）] 0908[农学-水产] 0707[理学-海洋科学] 09[农学] 0713[理学-生态学]
基 金：国家“八六三”高技术研究发展计划(2012AA092204) 国家“九七三”重点基础研究发展计划(2010CB126405) 国家基础科学人才培养基金(J1310020)~~
摘 要：为研究栉孔扇贝贝壳形成机理,首先应用质谱分析的方法,研究了几丁质酶在栉孔扇贝贝壳的蛋白质组中所占的比例。进一步利用RACE技术克隆获得栉孔扇贝几丁质酶的c DNA,全长共1587 bp,可编码439个氨基酸残基。氨基酸序列的功能结构域分析表明,该几丁质酶具有保守的几丁质酶特征结构域。组织表达分析表明,栉孔扇贝几丁质酶在外套膜组织中表达量最高,并且在外套膜边缘的表达量高于外套膜中心,推测其参与了贝壳的形成。应用实时定量PCR方法,检测贝壳损伤修复过程中基因表达水平,结果显示,几丁质酶基因表达水平呈现下调趋势,暗示其作为负调控因子参与贝壳修复过程。利用RNAi技术降低外套膜组织中几丁质酶基因的表达水平,同时应用扫描电子显微镜观察贝壳内表面的结构,发现贝壳矿物晶体片层的轮廓呈现不规则沉积。综合以上实验结果,推测几丁质酶通过水解几丁质来保证有机框架的有序性,从而对贝壳形状和外观起到调控作用。研究几丁质酶的基因组织表达规律及其生物学功能,将有助于揭示贝壳生物矿化的机制。
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