人β-防御素3与结缔组织生长因子共表达重组慢病毒载体的构建及表达

作     者：孙洁 钱智勇 刘静 张欣然 刘翠 刘东华 郭红延 郭希民 SUN Jie;QIAN Zhi-yong;LIU Jing;ZHANG Xin-ran;LIU Cui;LIU Dong-hua;GUO Hong-yan;GUO Xi-min

作者机构：北京武警总医院口腔医学中心北京100039 军事医学科学院基础医学研究所北京100850 

出 版 物：《军事医学》 (Military Medical Sciences)

年 卷 期：2017年第41卷第1期

页      面：38-42页

学科分类：1003[医学-口腔医学] 100302[医学-口腔临床医学] 10[医学] 

主　　题：重组慢病毒 人β-防御素3 结缔组织生长因子 骨髓间充质干细胞 

摘      要：目的体外构建共表达人β-防御素3(hBD3)与结缔组织生长因子(CTGF)的重组慢病毒,并检测其对骨髓间充质干细胞(BMSC)的转染效率及表达情况。方法体外构建携带hBD3、CTGF和增强绿色荧光蛋白(EGFP)基因的重组慢病毒表达载体,测定病毒滴度。转染BMSC,确定最适感染倍数(MOI)值。采用荧光显微镜和流式细胞仪检测病毒的转染效率及传代稳定性。Western印迹检测目的蛋白的表达。结果经PCR和测序分析鉴定,成功构建了携带hBD3和CTGF基因的重组慢病毒载体Lenti-CTGF-hBD3-EGFP、Lenti-hBD3-EGFP和Lenti-EGFP,检测病毒滴度分别为3.21×10~8、5.80×10~8和1.16×10~9。病毒转染BMSC最适MOI值为150。荧光显微镜下,转染后BMSC绿色荧光效率高;流式细胞仪检测病毒的转染效率,Lenti-CTGF-hBD3-EGFP为79.72%,Lenti-hBD3-EGFP为83.08%,Lenti-EGFP为84.43%,且都稳定遗传。Western印迹显示目的蛋白表达成功。结论成功构建了共表达hBD3、CTGF的重组慢病毒载体,并能在BMSC中高效、稳定表达,为进一步研究hBD3与CTGF的应用奠定了基础。