哺乳类细胞参与MNNG诱导的非定标性突变发生基因的分离和功能研究

作     者：胡文蔚 余应年 陈星若 宋韬 谢海洋 

作者机构：浙江大学医学院病理生理教研室!杭州310006 

出 版 物：《癌变·畸变·突变》 (Carcinogenesis,Teratogenesis & Mutagenesis)

年 卷 期：1999年第11卷第6期

页      面：286-287页

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 071007[理学-遗传学] 

基　　金：国家自然科学基金 浙江省自然科学基金 

主　　题：细胞组 哺乳类细胞 定标 决标 突变率 相关基因 MNNG 

摘      要：目的：遗传不稳定是存在于人类遗传性疾病及肿瘤中的一种重要现象，也可由环境致癌性理化因子诱发，但其发生的具体机制尚不清楚。本实验室已证实了烷化剂Ｎ－甲基－Ｎ’－硝基－Ｎ－亚硝基胍（ＭＮＮＧ）可以诱发出ｖｅｒｏ细胞的遗传不稳定状态，表现为延迟发生的非损伤部位ＤＮＡ突变率增加（非定标突变），且突变谱明显不同于由ＭＮＮＧ直接攻击引起的定标性突变。转录抑制剂放线菌素Ｄ可抑制这种突变的形成，提示它的发生依存于基因表达的改变。本研究目的是分离筛选参与以非定标性突变为特征的遗传不稳定发生的相关基因。方法：利用反义核酸技术，对本实验室用差异显示方法分离得到的ＥＳＴ片段进行功能分析。首先改建了两个真核表达载体的抗性，利用抗性选择使之进入细胞后不会干乱利用穿梭质粒ｐＺ１８９进行非定标性突变率检测的实验系统。利用此载体构建含反向插入片段的真核细胞表达重组体并转染细胞，以获得反义ＲＮＡ阻断其相应基因的表达，再检测非定标性突变率的变化。结果：筛选得到两个ＥＳＴ片段（片段９，片段１０），它们相关基因的表达被阻断后，非定标突变率均发生了显著的改变。９号片段相关基因的表达阻断后，非定标性突变率显著增高，ｖｅｒｏ细胞组、含空载体的ｖｅｒｏｐＭ...